詳細介紹
組織來源:牙周膜組織
種屬來源:小鼠
細胞簡介:小鼠牙周膜成纖維細胞分離自牙周膜組織;牙周膜(牙周韌帶、牙周間隙)是由致密結締組織所構成。多數(shù)纖維排列成束,纖維的一端埋于牙骨質內(nèi),另一端則埋于牙槽窩骨壁里,使牙齒固位于牙槽窩內(nèi);牙周膜內(nèi)有神經(jīng)、血管、淋巴和上皮細胞等。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的牙周膜成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基:中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。牙周膜成纖維細胞(PLFs)作為牙周膜的主體細胞,是牙周膜主要的間質細胞,它不僅具有合成膠原、基質、彈力纖維和糖蛋白的功能,還有吸收膠原吞噬異物的能力,還參與了牙周組織的病變、修復及再生過程?,F(xiàn)在,利用牙周膜細胞建立體外模型,已經(jīng)成為有關員研究牙周組織疾病的重要手段。
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
一、細胞基本屬性
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 商品貨號 |
小鼠牙周膜成纖維細胞 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | A01X1979 |
二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
三、使用方法
小鼠牙周膜成纖維細胞是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣,在技術部標準操作流程下,細胞可傳2-3代;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養(yǎng)基終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4)待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min);消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化;
3)經(jīng)1000rpm,離心5min,丟棄上清,用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi);
4)待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
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四、注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和技術部溝通;由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。