詳細介紹
中文名稱:CFSE/PI雙染細胞毒性檢測試劑盒
英文名稱:
產品規(guī)格:500T
發(fā)貨周期:1~3天
CFSE/PI 雙染細胞毒性檢測試劑盒是利用細胞熒光染料CFSE(CFDA-SE)和PI對細胞進行染色,利用CFSE標記靶細胞,PI標記死的靶細胞來區(qū)分不同的細胞,活的靶細胞成綠色,死的靶細胞成紅色和綠色,從而檢測細胞毒性作用。根據不同的實驗方案設計,可以用來檢測化合物的細胞毒性作用。也可以用來檢測殺傷性T 細胞或NK 細胞介導的細胞毒作用。 |
CFDA-SE 是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料,可以標記活體細胞。CFDASE是一種帶有琥珀酰亞胺(NHS)的熒光染料,可以結合細胞內的蛋白質。CFDASE在結構上將酚羥基部位改造成AM體,所以自身不發(fā)熒光,熒光背景低,脂溶性高,能夠輕易穿透細胞膜,進入細胞內的CFDASE的AM 部位能被細胞內酯酶水解生成CFSE,通過共價結合賴氨酸側鏈的氨基而摻入細胞內和細胞表面的蛋白,且結合后發(fā)出強的綠色熒光。CFSE的琥珀酰亞胺(NHS)和細胞內蛋白質的氨基部位結合,固定在細胞內,不會漏出細胞外。CFSE進入細胞后定位于細胞膜、細胞質和細胞核,在細胞核的熒光強。
CFSE毒性小,不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單,且不用放射性同位素,不存在安全隱患。可以更快速,更準確和更安全地得到想要的實驗數據。
CFSE/PI標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞毒性檢測。
CFSE標記細胞呈綠色熒光,熒光波長:λex=496 nm,λem=516 nm。流式檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm,此時的發(fā)射波長為516nm,使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。PI標記細胞呈紅色熒光,流式檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm,此時的發(fā)射波長為647nm,使用流式細胞儀檢測時可以采用FL2 detection channel。
CFSE標記的細胞除了流式細胞儀檢測細胞毒性外,還可單染后用于細胞增殖檢測,或者用熒光酶標板定量活細胞數目,或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。
儲存條件:CFSE探針-20℃避光保存;溶解液-20℃保存;PI染色液2-8℃避光保存。
有效期:六個月。
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。
操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細胞00μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入00微升5000~0000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)
Vildagliptin(標準品)英文名稱: Ifosfamide促腎上腺皮質激釋放因子抗體包裝1g
α-甘(標準品)英文名稱: Ifosfamide促腎上腺皮質激釋放因子抗體包裝5g
α-對羥基甘(標準品)英文名稱: Pramipexole 2HCL monohydrate5號染色體開放閱讀框54抗體包裝1g
α-代-β-英文名稱: Pramipexole 2HCL monohydrateCD93抗體包裝5g
α-基吡啶(標準品)英文名稱: Vinblastine Sulfate嗜粒趨化蛋白CCL6抗體包裝5g
α-三聯(lián)噻吩(標準品)英文名稱: Vinblastine Sulfate6號染色體開放閱讀框81抗體包裝1g
α-酮戊二(標準品)英文名稱: Vinblastine Sulfate巨噬炎性蛋白1β抗體包裝1g
β-Estradiol(標準品)英文名稱: TemozolomideNK抑制性受體2DL4抗體包裝5g
β-(標準品)英文名稱: TemozolomideNK抑制性受體2DS4抗體包裝1g
β-環(huán)糊精(標準品)英文名稱: AminoglutethimideNK抑制性受體3DL1抗體包裝5g
阿達唑(標準品)英文名稱: Aminoglutethimide7號染色體開放閱讀框46抗體包裝100g
阿達帕林(標準品)英文名稱: Flutamide蛋白磷PP2A癌抑制蛋白抗體包裝25g
阿德福韋(標準品)英文名稱: Flutamide巨噬甘露糖受體CD206抗體包裝1g
阿德福韋/阿德福韋酯(標準品)英文名稱: Cyclophosphamide淋巴衍生C-型凝集抗體包裝5g
唑(標準品)英文名稱: Cyclophosphamide5號染色體開放閱讀框60抗體包裝1g
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品血管生成抑制因子試劑盒新對葉百部堿;Neotuberostem
慢生大豆根瘤菌Bradyrhizobium│japonicum 質量規(guī)格:含量>98.5%,BR血管生成樣蛋白4試劑盒小蕓木;Micromelin
: =ATCC17588=IFO14165=IAM12668資源名稱: 施氏假單胞菌 質量規(guī)格:>98.5%,BR血管生成樣蛋白3試劑盒薟精;Darutigenol
CFSE/PI雙染細胞毒性檢測試劑盒氧化鉺
其他 氧化鉺(III)
英文名稱: Erbium(III)oxide
其他英文名稱: Erbia;Dierbium trioxide
產品規(guī)格: 3N
包 裝: 5克/25克/100克
CAS號:12061-16-4
Er2O3=382.52
級別:3N
含量:≥99.9%
性狀:粉紅色粉末。易吸收濕氣和二氧化碳。加熱至1300℃時轉變?yōu)榱襟w結晶。不熔融。微溶于礦,不溶于水。相對密度 8.64。有刺激性
用途:生化研究。熒光體活化劑。吸收紅外線的玻璃磁性材料。
保存:RT