轉(zhuǎn)基因品系棉花MON1445 PCR試劑盒

儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

?
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
三化-丁試劑(10-20%)(1mL×10)Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor β (Tyr1150/1151) (19H7) Rabbit mAb溴-5-氟甲酸

三氟化-異試劑(10-20%)(1mL×10)Insulin Receptor β (4B8) Rabbit mAb氟酸

三氟化-甲試劑(10-20%)(1mL×10)Insulin Receptor β (4B8) Rabbit mAb(2-溴酰基)吡啶鹽

三氟化-試劑(10-20%)(1mL×10)[用于氣相色譜]Phospho-Insulin Receptor β (Tyr1345) (14A4) Rabbit mAb氨基噻吩

1-甲基-硝基-1-亞硝基胍(加約50%水濕潤(rùn),本品干重約為5g(>95.0%(T))IGF-I Receptor β Antibody(二氨基)

N-亞硝基-N-甲基尿烷(>95.0%(GC))IGF-I Receptor β Antibody2-氨基-5-硝基二甲酮

三甲基硅重氮(約10%的己烷溶液,約0.6mol/L)CNOT1 (D3V5H) Rabbit mAb反式-(氨基環(huán)己基)氨酸叔丁酯

N-酰基咪唑(>98.0%(GC)(T))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Antibody甲氧甲?；寤?/span>

雙三氟酰(>98.0%(N))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) Antibody2,二-5-甲基嘧啶

七氟丁酸(>98.0%(GC)(T))F4/80 (D4C8V) XP® Rabbit mAb2-(二甲基氨基磺酰基)酸

七氟丁酸酐(>95.0%(T))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb三正丁基疊氮化錫

1-(七氟丁酰)咪唑(>97.0%(GC)(T))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb鄰芐

N-甲基雙(三氟酰)(>97.0%(GC))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb5-(甲氧羰基)-2-吡啶羧酸

五氟酸酐(>95.0%(GC))NF-κB1 p105/p50 Antibody(三氟甲氧基)酸

五氟甲酰(>98.0%(GC)(T))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (7F1) Mouse mAb酸

三酐(>98.0%(GC))Phospho-NF-κB p65 (Ser468) Antibody3,6-二溴噠

丁基酸(含有數(shù)量不等的酸酐)(>94.0%(T))Phospho-MYPT1 (Ser507) Antibody異丁基三氧基硅烷

酸(含有數(shù)量不等的酸酐)(97.0-117.0 %)Phospho-MYPT1 (Ser507) Antibody甲氧基
轉(zhuǎn)基因品系棉花MON1445 PCR試劑盒100ml1g地衣紅CoprogenⅢ

化銅(>99%,BR) 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR Copper(II) bromide 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞英文名稱：3T3A31

標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, L亮氨（白氨）

5g5g地衣紅glucose oxidase

升麻  英文名稱：Cimicifuga   保存：-20℃   規(guī)格：1g 突觸素樣蛋白1抗體

標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, L酪氨

1g25g派洛寧Balkaloid

8-姜酚（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 8-Gingerol 鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamsus人羊膜上皮細(xì)胞

標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, L賴氨鹽鹽