小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞

小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞；PUMC-mips-B5小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞；PUMC-mips-B6小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞；PUMC-mips-D2SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；PUMC-HUVEC-T1人乳腺癌細(xì)胞（穩(wěn)轉(zhuǎn)pTet-on質(zhì)粒）；MDA-MB-231-B2tTA基因修飾的小鼠睪丸畸胎瘤細(xì)胞（B類）；F9-CAG-tTA-3A1tTA基因修飾的

一、細(xì)胞基本屬性

 

組織來源：胎盤組織

種屬來源：小鼠

細(xì)胞簡介：小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞分離自胎盤組織；絨毛膜是構(gòu)成胎盤的胎兒部分，占妊娠胎盤的主要部分。妊娠足月胎盤的絨毛滋養(yǎng)層主要由合體滋養(yǎng)細(xì)胞組成，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞僅散在可見，滋養(yǎng)層的內(nèi)層為基底膜。滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖、功能調(diào)節(jié)失常與多種妊娠相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系；絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞是構(gòu)成胎盤屏障的主要組織結(jié)構(gòu)，而胎盤是妊娠期間具有物質(zhì)交換與代謝，分泌激素和防御等功能的重要器官。

培養(yǎng)基：MSCM基礎(chǔ)培養(yǎng)基：，F(xiàn)BS，Penicillin，Streptomycin等；

換液頻率:每2-3天換液一次

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可3-5代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三、使用方法

小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈梭形、多角形，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗。

客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實驗

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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