培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
熒光染料PKH67 是一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料,可以標(biāo)記活體細(xì)胞,通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞。對細(xì)胞毒性較小,熒光背景低,脂溶性高,能夠輕易穿透細(xì)胞膜,有著強(qiáng)而穩(wěn)定的綠色熒光。經(jīng)PKH67標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究,且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能。 |
在細(xì)胞分裂增殖過程中,PKH67的熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂而逐級(jí)遞減,標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中,因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半,根據(jù)這一特性,它可被用于檢測細(xì)胞增殖,細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等方面。PKH67標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一,并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過程中,PKH67標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中,熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半,通過流式細(xì)胞儀根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同,可檢測出未分裂細(xì)胞,分裂一次(1/2的熒光強(qiáng)度),二次(1/4的熒光強(qiáng)度),三次(1/8的熒光強(qiáng)度),以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。PKH67可檢測分裂次數(shù)多達(dá)六次甚至更多。
除了用于細(xì)胞增殖檢測,PKH67 還可以用于細(xì)胞的體外盒體內(nèi)示蹤,標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定,陽性標(biāo)記率達(dá)98%以上,標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好,能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況;或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi),可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。
PKH67標(biāo)記的細(xì)胞用于體內(nèi)觀察可以長達(dá)數(shù)周之久,它常被用來做活體細(xì)胞檢測實(shí)驗(yàn)和用熒光電鏡觀察細(xì)胞長期活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)。PKH67 毒性較小,不影響細(xì)胞的增殖能力。此方法操作簡單,且不用放射性同位素,不存在安全隱患。可以更快速,更準(zhǔn)確和更安全地得到想要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
PKH67標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測。
PKH67標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光,熒光波長:λex=490 nm,λem=502 nm。
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
阿利多(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dexamethasone AcetateCD44V5抗體包裝25g
阿侖磷鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dexamethasone Acetate22號(hào)染色體開放閱讀框23抗體包裝5g
阿莫西林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trimethoprim角蛋白19抗體包裝1g
阿尼西坦(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trimethoprim1號(hào)染色體開放閱讀框147抗體包裝5g
阿齊沙坦(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sivelestat sodium 膽固21-羥化抗體包裝1g
阿奇霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nevirapine畸胎瘤衍化生長因子抗體(C端)包裝25g
阿米特(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nevirapine補(bǔ)體C1qL3鏈多肽抗體包裝5g
阿司咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfamethoxazole(SMZ)腫瘤/抗原27抗體(高遷移率族蛋白)包裝100g
阿糖腺苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfamethoxazole(SMZ)1號(hào)染色體開放閱讀框228抗體包裝25g
阿替洛爾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cefpirome Sulfate碳酐3抗體包裝5g
阿托伐醌,阿托喹酮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cefpirome Sulfate親環(huán)蛋白(親環(huán))PPIA抗體包裝1g
阿魏鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amisulpride鈣網(wǎng)蛋白抗體包裝250mg
阿魏哌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amisulpride腫瘤/抗原65包裝5g
阿西美辛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fenofibric acid2號(hào)染色體開放閱讀框25抗體包裝1g
阿昔莫司,阿西莫司(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fenofibric acid伴侶蛋白9抗體包裝5g
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,BR,可用于培養(yǎng)血管生成4試劑盒Α-香樹脂酮;α-Amyrenone
沃遜納爾沙門氏菌Salmonella│wassenaar 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血管生成2試劑盒相思豆;L-Abrine
: HBUM84819資源名稱: 鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%血管生成1試劑盒相思子堿;L-Abrine
PKH67細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒氧化銩
其他 銩氧;三氧化二銩;三價(jià)氧化銩;三氧化二銩(III)
英文名稱: Thulium oxide
其他英文名稱: Thulium(III) oxide;Thulia
產(chǎn)品規(guī)格: 3N
包 裝: 5克/25克/100克
產(chǎn)品規(guī)格: SP
包 裝: 1克
CAS號(hào):12036-44-1
Tm2O3=385.87
級(jí)別:SP
級(jí)別:3N
含量:≥99.9%
稀土雜質(zhì):≤2000ppm
性狀:帶綠色致密粉 末。在空氣中易吸收水分和二氧化碳。加熱后有紅色閃光,繼續(xù)加熱轉(zhuǎn)黃色再恢復(fù)到。能緩慢地溶于強(qiáng)。相對密度8.6。有刺激性
用途:生化研究。金屬銩
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