小鼠腎小球系膜細(xì)胞

小鼠腎小球系膜細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：人腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞NCI-H929人骨髓瘤細(xì)胞NCI-H82人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-N87人胃癌細(xì)胞NCI-N87+LUC人胃癌細(xì)胞熒光標(biāo)記NCM 460人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞NK-92 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞NK-92 MI人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞NOZ人膽囊癌細(xì)胞NPC/HK-1人鼻咽癌細(xì)胞Nthy-ori 3-1人甲狀腺正常細(xì)胞OCI-AML

小鼠腎小球系膜細(xì)胞

一、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：小鼠腎小球系膜細(xì)胞分離自腎小球組織；腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動(dòng)脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進(jìn)行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球系膜是位于腎小球毛細(xì)血管袢之間的一種特殊間充質(zhì)，由系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)組成。腎小球系膜細(xì)胞是腎小球內(nèi)非常活躍的細(xì)胞，具有分泌細(xì)胞基質(zhì)、產(chǎn)生細(xì)胞因子、吞噬和清除大分子物質(zhì)及類似平滑肌細(xì)胞收縮的功能。腎小球系膜細(xì)胞增生和基質(zhì)的過多產(chǎn)生是多種腎小球腎炎的主要病理表現(xiàn)。腎小球系膜細(xì)胞的培養(yǎng)是研究系膜擴(kuò)張、瘢痕形成和腎小球硬化的理想方法。系膜細(xì)胞的主要作用可能有：①收縮作用，入球小動(dòng)脈和出球動(dòng)脈的收縮作用受系膜細(xì)胞的調(diào)節(jié)，以影響毛細(xì)血管袢的內(nèi)壓和濾過率；②支持作用，它填充于毛細(xì)血管袢之間，支持毛細(xì)血管的位置；③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜內(nèi)的大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì)；④分泌腎素，在腎缺血或免疫復(fù)合物沉積時(shí)，系膜細(xì)胞增生且分泌腎素。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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