詳細介紹
小鼠毛囊干細胞
一、細胞基本屬性
細胞名稱 | 小鼠毛囊干細胞 | 商品貨號 | A01X1912 |
組織來源 | 毛囊組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡介:小鼠毛囊干細胞分離自皮膚毛囊組織;毛囊是表皮細胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭,中心是一根毛發(fā),立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上,附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸,毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中,毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度,它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘,以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織。毛囊干細胞是在毛囊外根鞘隆突部中的一種細胞。毛囊干細胞屬于成體干細胞,在體內(nèi)處于靜止狀態(tài),在體外培養(yǎng)作用下表現(xiàn)出驚人的增殖能力。研究發(fā)現(xiàn),毛囊干細胞具有多向分化潛能,它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺,參與皮膚創(chuàng)傷愈合的過程。毛囊干細胞和其它成體干細胞一樣,具有慢周期性、未分化性、自我更新和體外增殖能力強等特點。毛囊干細胞分化經(jīng)毛囊干細胞(hair follicle stem cells,F(xiàn)SC)、短暫增殖細胞(transit amplifying cells,TAC)有絲分裂后分化細胞(postmitotic differentiating cells,PDC)三個階段。毛囊干細胞在光鏡下呈立方形,細胞體積小,核漿比率大,表面光滑,皺褶少,又被稱為非鋸齒形細胞,細胞體積的增大與增殖能力呈負相關(guān)。超微結(jié)構(gòu)顯示細胞表面有少許微絨毛,細胞核存在許多卷曲,染色質(zhì)彌散分布,這些形態(tài)特征均表現(xiàn)出原始細胞的特性。
原代細胞分離培養(yǎng)的思路:
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機體中取出,經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定。
實驗步驟:
一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。
七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。
注意事項:
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,yi酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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