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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1975 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 正常眼球組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
詳細(xì)介紹
組織來源：正常眼球組織
種屬來源：小鼠
細(xì)胞簡介：結(jié)膜上皮是眼表的重要組成部分，是眼表的保護(hù)屏障，在維持淚膜的穩(wěn)定性、潤滑眼表、維持正常視力和眼表上皮損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用。上世紀(jì)90 年代，隨著人們對眼表的深入研究，提出了結(jié)膜上皮干細(xì)胞的概念，認(rèn)為結(jié)膜上皮細(xì)胞的自我更新來自結(jié)膜上皮干細(xì)胞。
培養(yǎng)基：原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：扁平的橢圓形、梭形或不規(guī)則形，不規(guī)則細(xì)胞
傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性。
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
一、細(xì)胞基本屬性
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 商品貨號 |
小鼠結(jié)膜上皮細(xì)胞 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | A01X1975 |
二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三、使用方法
小鼠結(jié)膜上皮細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈扁平的橢圓形、梭形或不規(guī)則形，不規(guī)則細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
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四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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