轉(zhuǎn)基因品系油菜RT73探針法qPCR試劑盒

服務流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務。

儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
石蠟切片組織PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達熒光顯微鏡　Claudin 7 　100 ul

載玻片細胞PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡　CLEC10A/CD301 　100 ul

冰凍切片組織PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡　CPOX(Coproporphyrinogen oxidase) 　100 ul

石蠟切片組織PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡　CIN85 　100 ul

細胞PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達比色法定量　CREB1 　100 ul

細胞PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達熒光定量　CKAP4 　100 ul

PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達西方雜交分析　CKS2 　20 ul

PI-3 KINASE P110BETA蛋白免疫共沉淀分析　Cortactin 　100 ul

PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達定量　Claudin 23 　250 ml

細胞PP2A蛋白表達流式細胞儀　CREB3L2 　25 ml

載玻片細胞PP2A蛋白表達熒光顯微鏡　CREST 　5 mg

冰凍切片組織PP2A蛋白表達熒光顯微鏡　CREB1 　5 mg

石蠟切片組織PP2A蛋白表達熒光顯微鏡　Claudin 7 　1 mg

載玻片細胞PP2A蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡　CREB3L2 　100 ul

冰凍切片組織PP2A蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡　CD81(CD81 antigen) 　100 ul

石蠟切片組織PP2A蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡　CKS2 　100 ul
轉(zhuǎn)基因品系油菜RT73探針法qPCR試劑盒Bradyrhizobium│sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 與花生共生固氮培養(yǎng)基: 0053生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；礦物油法

卡勞沙門氏菌種屬: Salmonla│carrau提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 6,14,24　y　1,7培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

福氏志賀氏菌種屬: Shigla│flexneri提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: B　6　VI　4...培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Streptomyces│sp.提供形式: 凍干物模式菌株: no培養(yǎng)基: 38生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Metarhizium│anisopliae提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃

Cephalosporium│sp.分離基物: 云南迪慶殼孢蟲草提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no應用領域: 蟲草屬無性世代真菌研究。培養(yǎng)基: 14生長條件: 15℃存儲條件: 定期移植法

Escherichia│coli提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Escherichia│coli提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0002生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；礦物油法；定期移植法

Lactococcus│lactis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 6生長條件: 30℃存儲條件: 定期移植法
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。