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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：漢坦病毒通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒50次
產(chǎn)品貨號：FS-P013553
產(chǎn)品規(guī)格：50次
產(chǎn)品分類：純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
Human Fibrinogen like peptide 2,fgl2 ELISA Kit 人纖維介蛋白Multi-class antibodies： 48T
Snake poison Protein 蛇毒蛋白抗體(中華眼鏡蛇)Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat Mouse IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 0.1ml
AFP-L3(Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 3) ELISA Kit 人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3 96T
NECAB1 神經(jīng)元鈣結(jié)合相關(guān)蛋白EFCBP1抗體 0.2ml
Phospho-Btk (Ser180) 磷化蛋白酪激ATK抗體 0.1ml
Snake poison Protein 蛇毒蛋白抗體(中華眼鏡蛇)Multi-class antibodies： 0.2ml
tox IgM(Human toxoplasma IgG antibody) ELISA Kit 人抗弓形體IgM抗體Multi-class antibodies： 48T
PPAR-delta/beta D型-過氧化活化增生受體抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Heparanase 乙酰肝抗體 0.1ml
EL ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮脂肪 96T
Prostaglandin I2 Receptor 前列環(huán)受體抗體 0.2ml
phospho-Casein kinase I isoforms gamma 1+2+3 ( Tyr263) 磷化酪蛋白激1γ1+γ2+γ3抗體 0.1ml
PPAR-delta/beta D型-過氧化活化增生受體抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Donkey rabbit IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.1ml
phospho-GIRK1 (Ser185) 磷化G蛋白激活內(nèi)向鉀通道1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ASAH2 ?；拾贝济擋?抗體 0.2ml
IASPP/FITC 熒光標(biāo)IASPP蛋白抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Monkey IgM/Bio 生物標(biāo)記的兔抗猴IgM 0.3ml
phospho-Akt(Thr450) /FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷化蛋白激B抗體(蘇磷化位點(diǎn)：450)IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
漢坦病毒通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒50次哈氏弧菌種屬: Vibrioharveyi分離基物: 海安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 102生長條件: 30℃
雙歧雙歧桿菌種屬: Bifidobacteriumbifidum(Tissier)Orla-Jensen安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 乳制品發(fā)酵；食品飲料培養(yǎng)基: 62生長條件: 37℃
痤瘡丙桿菌種屬: Propionibacteriumacnes(Gilchrist)DouglasandGunterdepositedasCorynebacteriumacnes安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 多糖劑、厭氧鑒定控制菌株、API質(zhì)量控制菌株培養(yǎng)基: 55生長條件: 37℃
橢圓釀酒酵母種屬: Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 啤酒酵母培養(yǎng)基: 0013生長條件: 25-28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；礦物油法
α干擾(IFN-α)ELISA試劑盒D-2-甘氨 99%4-Boc-氨基 98%2-(>99%,BR)
α輔肌動蛋白4(ACTN-4)ELISA試劑盒L?(+)-α-甘氨 98%鉻吡啶 98%5-硝基-2-甲(>98%,BR)
α-輔肌動蛋白3(ACTN-3)ELISA試劑盒3,5-二甲基-4-吡唑 97%(R)-1-Boc-3-羥基吡咯 98% 2-乙酰(>98.5%,BR)
α輔肌動蛋白3(ACTN-3)ELISA試劑盒4-羥基-3-甲 98%對四聯(lián) 98%2-(>98%,BR)
α輔肌動蛋白1(ACTN-1)ELISA試劑盒3-硝基鄰二甲 96%紅熒烯 99%2-乙基磺鈉(>98%,BR)
α防御4(NP-4)ELISA試劑盒3-硝基鄰二甲 99%(R)-3-氨基-1-BOC- 98%2'-脫氧肌酐-5'-鈉(>98%,BR)
α淀粉(AMY1)ELISA試劑盒吡唑 99%(R)-(-)-3- 氨基吡咯 98%鄰乙氧基甲(>98%,BR)
α淀粉(AMS/AMY)ELISA試劑盒亞硫鈣 90%R-1-芐氧羰基－羥基吡咯 95%鄰乙氧基甲(>98%,BR)
α半乳糖基抗體(Gal)ELISA試劑盒四乙基米氏酮 99%三氧化硫-吡啶復(fù)合物 97%2-乙基丁(>99%,BR)
α半乳糖基(α-Gal)ELISA試劑盒米氏酮 98%(S)-1－叔丁氧羰基－3－氨基 98%鄰羥基乙酮(>99%,BR)
α半乳糖苷(αGAL)ELISA試劑盒N-甲基二乙 98%(S)-3-羥基吡咯鹽鹽 97%2-羥基(>98%,BR)
αN已酰氨基葡糖苷(αNAG)ELISA試劑盒N-甲基二乙 99%(S)-3-氨基吡咯 98%2-異基咪唑(>98%,BR)
αL巖藻糖苷(AFU)ELISA試劑盒2-(甲氨基)乙 99%S-1-芐氧羰基-3-羧基吡咯 97%2-萘乙(植物級)
αL艾杜糖苷(IDUA)ELISA試劑盒2，2'-硫代雙乙 99%三(4-) 98%2-萘甲(>98%,BR)
α2纖溶抑制物(α2-PI)ELISA試劑盒 CP,97.0% （劇品）8-羥基喹啉鋁 98%乙-2-萘酯(>98%,BR)
α2抗纖溶(α2-AP)ELISA試劑盒 AR,99.0%（劇品）2,6-二氟 98%2-基-beta-D-木糖苷(>98%,BR)
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
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