詳細(xì)介紹
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Senescence β-Galactosidase Staining Kit | >100次 | 1~3天 |
商品介紹:
本試劑盒是一種基于衰老時(shí)SA-β-Gal(senescence-associated β-galactosidase)活性水平上調(diào)而對衰老細(xì)胞或組織進(jìn)行染色檢測的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測到細(xì)胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細(xì)胞的衰老檢測,也可以用于組織切片的衰老檢測。 |
試劑盒組份:
β-半乳糖苷酶染色固定液—————100ml
X-Gal溶液————————————5ml
β-半乳糖苷酶染色液A——————1ml
β-半乳糖苷酶染色液B——————1ml
β-半乳糖苷酶染色液C——————100ml
絕大多數(shù)正常細(xì)胞被認(rèn)為僅有有限的分裂能力,在不能分裂后就進(jìn)入衰老(senescence)狀態(tài)。此時(shí)細(xì)胞仍然是存活的,但細(xì)胞的基因和蛋白的表達(dá)譜發(fā)生了很大改變。衰老(senescence)的細(xì)胞不能在一些常規(guī)的刺激下再誘導(dǎo)細(xì)胞分裂,并且衰老細(xì)胞的細(xì)胞周期分布也比較特殊,不同于一些損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞休眠,也不同于細(xì)胞生長接觸抑制的情況。衰老細(xì)胞細(xì)胞通常體積變大,表達(dá)pH 6.0時(shí)有高酶活性的β-半乳糖苷酶。細(xì)胞衰老也被認(rèn)為是生物體抑制腫瘤的一種方式,同時(shí)也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。
本細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒,以X-Gal為底物,在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會(huì)生成深藍(lán)色產(chǎn)物。從而在光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
頭孢匹林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: GeniposideDYX1C1蛋白抗體包裝5g
頭孢羥芐 (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: GeniposideE3泛蛋白連接dzip3抗體包裝1g
頭孢曲松鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 17-Methyltestosterone三磷腺苷依賴解旋DDX23抗體包裝250mg
頭孢噻吩(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tetrahydro-L-Biopterin free base多能發(fā)育相關(guān)基因5抗體包裝5g
頭孢噻呋鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tirofiban HCl三磷腺苷依賴解旋DDX3抗體包裝100mg
頭孢噻肟鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tirofiban HCl磷化三磷腺苷依賴解旋DDX3抗體包裝1g
頭孢妥侖匹酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Pullulan迪格弗-梅爾基奧爾-克勞森綜合征相關(guān)蛋白抗體包裝500mg
頭孢西丁鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vitamin E,dl-α-tocopherol雙氧化激活因子2抗體包裝5g
頭孢西?。^孢西丁)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: StavudineRNA結(jié)合泛連接DZIP3抗體包裝100mg
頭孢唑啉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Stavudine二氫二脫氫1/2抗體包裝500mg
頭孢唑啉鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Moclobemide形態(tài)發(fā)生紊亂關(guān)聯(lián)激活因子2抗體包裝1g
頭孢唑肟(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Moclobemide質(zhì)分裂付出蛋白2抗體包裝5g
頭孢唑肟鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Astragaloside IV質(zhì)分裂付出蛋白4抗體包裝1g
土拉霉A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Astragaloside IV質(zhì)分裂付出蛋白5抗體包裝250mg
褪黑,松果體(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nateglinide淋巴抗原75抗體包裝50ml
: D8(1957)資源名稱: 傷門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR維生D2試劑盒四氫小檗堿;Tetrahydroberb
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品維生C試劑盒蘇木;Hematoxylin
膠孢刺盤孢Colletotrichum│gloeosporioides 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP,可用于培養(yǎng)維生B6試劑盒雙醋瑞因;1,8-Diacetoxy-3
細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒溴化銅
其他 二溴化銅;二溴化銅(II)
英文名稱: Cupric bromide
其他英文名稱: Copper(II) bromide; Copper bromide
產(chǎn)品規(guī)格: AR,98.5%
包裝:250克
CAS號:7789-45-9
CuBr2=223.35
級別:AR
含量:98.5~100.5%
氯化物:≤0.2%
硫鹽:≤0.015%
水不溶物:≤0.01%
鐵:≤0.01%
堿金屬及堿士金屬:≤0.2%
性狀:黑色似碘片的單斜結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。易吸濕。易溶于水,溶于乙、和水,幾乎不溶于和濃硫。相對密度(d204 )4.71。熔點(diǎn)498℃。沸點(diǎn)900℃。
用途:生化研究。分析試劑。有機(jī)合成溴化劑。乙?;奂兹┓€(wěn)定劑。濕度指示劑。
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