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詳細(xì)介紹
人關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 人關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1411 |
組織來(lái)源 | 子宮組織 | 種屬來(lái)源 | 人 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁培養(yǎng) |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維樣細(xì)胞 |
培養(yǎng)基：原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系
傳代特性：細(xì)胞特性確定傳代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相： 空氣，95%；CO2 ，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介：滑膜是關(guān)節(jié)囊的內(nèi)層，淡紅色， 平滑閃光，薄而柔潤(rùn)，由疏松結(jié)締組織組成。關(guān) 節(jié)腔內(nèi)的所有結(jié)構(gòu)， 除關(guān)節(jié)軟骨、半月軟骨板以外,即便是通過關(guān)節(jié)腔的肌腱、韌 帶等均全部為滑膜所包裹。
滑膜分泌滑液， 在關(guān)節(jié)活動(dòng)中起重要作用。正常滑膜分為兩層，即薄的細(xì)胞層(內(nèi) 腔層)和血管層(內(nèi)膜下層)，是血管豐富的關(guān)節(jié)囊內(nèi)膜，貼附于非關(guān)節(jié)面部分，覆 蓋于關(guān)節(jié)囊內(nèi)的骨面上， 不在軟骨面上， 此部分稱為邊緣區(qū)或“裸區(qū)"。滑膜呈 粉紅色，光滑發(fā)亮、濕而潤(rùn)滑， 有時(shí)可見絨毛，內(nèi)含膠原性纖維。
滑膜細(xì)胞有A、 B兩型。巨噬細(xì)胞樣A型細(xì)胞， 表面有絲狀偽足、漿膜內(nèi)陷、囊泡 、線粒體、溶酶體、胞漿纖維和高爾基體，具有吞噬功能； B型成纖維樣滑膜細(xì)胞 (FLS) ，有高濃度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)， 是介導(dǎo) RA 關(guān)節(jié)破壞的主要細(xì)胞。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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