Caspase 1 活性檢測(cè)試劑盒

Caspase 1 活性檢測(cè)試劑盒公司*的商品：生長調(diào)節(jié)致癌因α/黑素瘤生激因子α 抗原硝異山梨酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Human
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商品介紹：

試劑盒組分：

裂解液——————8ml

檢測(cè)緩沖液——————8ml

Ac-YVAD-pNA(2mM)———200μl

pNA(10mM)——————200μl

Caspase是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1也稱interkeukin 1b conberting enzyme(ICE)，有時(shí)被寫作caspase-1或caspase 1，是caspase家族中可以剪切IL-1b前體蛋白或IL-18前體產(chǎn)生相應(yīng)成熟的細(xì)胞因子的caspase。Caspase 11可以剪切45kD的caspase 1前體蛋白，產(chǎn)生20kD和10kD的片段，這兩個(gè)片段可以形成異源二聚體(heterodimer)，并進(jìn)一步由兩個(gè)異源二聚體形成四聚體。Caspase 1可以通過剪切其凋亡Bcl-XL來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，并通過其對(duì)一些細(xì)胞因子前體的剪切來調(diào)控相關(guān)免疫反應(yīng)。

本caspase 1活性檢測(cè)試劑盒是基于caspase 1可以催化底物Ac-YVAD-pNA(acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline)，從而可以通過測(cè)定吸光度來檢測(cè)caspase 1的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收。

試劑盒中提供了caspase 1催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA，可以作為定量caspase 1酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品。

儲(chǔ)存條件：-20℃。
產(chǎn)品屬于：

培養(yǎng)操作步驟：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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Caspase 1 活性檢測(cè)試劑盒中性蛋白酶

其他分散酶

英文名稱：Neutral protease

其他英文名稱：Dispase

產(chǎn)品規(guī)格：BR，50u/mg

包裝：250克

CAS號(hào)：9068-59-1

級(jí)別：BR

活力：≥50units/mg

活力定義：1g固體酶粉，在30 oC，PH7.5條件下，1分鐘水解酪素產(chǎn)生1ug酪氨酸為1個(gè)酶活力單位，以u(píng)/g表示

穩(wěn)定pH：5.5～8.5

適PH：6.8～7.0

適溫度：45～50℃

用途：生化研究。裂開蛋白質(zhì)的肽鍵，有的蛋白水解作用，能水解纖維蛋白、黏蛋白。

保存：-20℃