中文名稱:阿爾瑪藍(lán)
英文名稱:Alamar Blue
產(chǎn)品規(guī)格:100T
發(fā)貨周期:1~3天
阿爾瑪藍(lán)(Alamar Blue)是一種氧化還原指示劑,能根據(jù)代謝活性產(chǎn)生吸亮度變化和熒光信號(hào)。這是一種安全無毒的染料,可用于細(xì)胞活性和細(xì)胞增殖的定量分析以及細(xì)胞因子生物測定和體外細(xì)胞毒性研究,能有效測定動(dòng)物、真菌和細(xì)菌細(xì)胞的天然代謝活性。Alamar Blue在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無熒光性,而在還原狀態(tài)下,轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物,反映所研究的細(xì)胞或微生物對(duì)氧分子的消耗,因而常被用作氧化還原指示劑,以顯示被觀察細(xì)胞和細(xì)菌的代謝活動(dòng)。這種測定是基于具有代謝活性的細(xì)胞將試劑轉(zhuǎn)換成熒光和比色指示劑的能力。在細(xì)胞增殖過程中,細(xì)胞內(nèi)NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高,處于還原環(huán)境。攝入細(xì)胞內(nèi)的染料被這些代謝中間體及細(xì)胞色素類還原后釋放到細(xì)胞外并溶于培養(yǎng)基中,使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍(lán)變成有熒光的粉紅色。受損和無活性細(xì)胞具有較低的天然代謝活性,因此對(duì)應(yīng)的信號(hào)較低。可以用普通分光光度計(jì)或熒光光度計(jì)檢測,其激發(fā)光波長在530-560 nm之間,發(fā)射光波長為590 nm。吸光度和熒光強(qiáng)度與活性細(xì)胞數(shù)成正比。 |
本品可廣泛地用于細(xì)胞增殖代謝,藥物的細(xì)胞毒作用的體外測定以及病原微生物的的快速檢測與鑒定。 與臺(tái)盼蘭、TTC、MTT、MTS等分析法相比,Alamar Blue具有更多的優(yōu)勢。Alamar Blue采用單一試劑,可以連續(xù)、快速地檢測細(xì)胞的增生狀態(tài)。由于Alamar Blue對(duì)細(xì)胞無毒、無害,不影響細(xì)胞的抗體合成與分泌等活性,因此可以對(duì)同一批細(xì)胞的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察,因此有操作簡便和幾乎不干擾細(xì)胞正常代謝的特點(diǎn)。
注意事項(xiàng)
1)需客戶自行準(zhǔn)備100%還原型Alamar Blue試劑。為得到還原型Alamar Blue,需配制Alamar Blue與細(xì)胞培養(yǎng)基的混合溶液,Alamar Blue與細(xì)胞培養(yǎng)基的比值為1:10,高壓滅菌15min。(不能對(duì)濃縮的Alamar Blue高壓滅菌,也不能用PBS配制溶液,因?yàn)?00%還原型Alamar Blue在PBS中不穩(wěn)定。)
2)為得到結(jié)果,建議實(shí)驗(yàn)前先摸索孵育時(shí)間和接種細(xì)胞數(shù)量。
3)合適密度的細(xì)胞可以增加檢測靈敏度。對(duì)于96 孔板,我們建議每孔接種100 微升細(xì)胞,細(xì)胞濃度范圍為:貼壁細(xì)胞在100-10,000/孔,懸浮細(xì)胞在2,000-50,000/孔,并以培養(yǎng)基為空白對(duì)照。對(duì)于384 孔板,細(xì)胞濃度和接種量均減半。
4)整個(gè)過程均應(yīng)為無菌操作,因?yàn)槲⑸镂廴疚锿瑯涌梢赃€原檢測試劑而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5)注意接種細(xì)胞濃度和加入檢測試劑后孵育時(shí)間。細(xì)胞濃度過高或孵育時(shí)間過長,會(huì)導(dǎo)致繼發(fā)性還原反應(yīng),產(chǎn)生無色和熒光消失。
6)孵育時(shí),須避光。
7)本產(chǎn)品可以使用熒光或分光光度計(jì)檢測,但熒光的靈敏度高,實(shí)驗(yàn)誤差小,推薦使用熒光檢測。
儲(chǔ)存條件:4℃,有效期一年
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
腭/肺/鼻上皮癌關(guān)聯(lián)蛋白(PLUNC)elisa試劑盒英文名稱:PLUNC ELISA Kit19號(hào)染色體開放閱讀框80抗體包裝100g
多效生長因子(PTN)elisa試劑盒英文名稱:PTN ELISA Kit半胱雙加氧1抗體包裝25g
多配體蛋白聚糖1(SDC1)elisa試劑盒英文名稱:SDC1 ELISA Kit膠原蛋白11A2抗體包裝5g
多聚免疫球蛋白受體(PIGR)elisa試劑盒英文名稱:PIGR ELISA KitCUL4B蛋白抗體包裝1g
多聚蛋白2(MMRN2)elisa試劑盒英文名稱:MMRN2 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框103抗體包裝5g
多功能肽2(LMP2)elisa試劑盒英文名稱:LMP2 ELISA Kit凋亡抑制因子2抗體包裝25g
多功能蛋白聚糖(VS)elisa試劑盒英文名稱:VS ELISA Kit促腎上腺皮質(zhì)激釋放激結(jié)合蛋白抗體包裝5g
多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT)elisa試劑盒英文名稱:DAT ELISA Kit3號(hào)染色體開放閱讀框23抗體包裝1g
多巴胺受體D4(DRD4)elisa試劑盒英文名稱:DRD4 ELISA Kit瓜環(huán)肽抗體包裝25g
多巴胺受體D3(DRD3)elisa試劑盒英文名稱:DRD3 ELISA Kit分裂核仁蛋白1抗體包裝5g
多巴胺受體D1(DRD1)elisa試劑盒英文名稱:DRD1 ELISA Kit鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激4抗體包裝1g
多胺氧化(PAOX)elisa試劑盒英文名稱:PAOX ELISA Kit磷化鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激4抗體包裝25g
對(duì)氧磷2(PON2)elisa試劑盒英文名稱:PON2 ELISA Kit膠原蛋白4a2亞基抗體包裝5g
對(duì)氧磷1(PON1)elisa試劑盒英文名稱:PON1 ELISA KitCD161c抗體包裝100g
端粒關(guān)聯(lián)蛋白1(TEP1)elisa試劑盒英文名稱:TEP1 ELISA Kit補(bǔ)體C1r鏈多肽抗體包裝25g
根瘤菌(紫云英)Mesorhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品孕激/孕酮試劑盒野馬追內(nèi)酯A;Eupalinolide
: ivcas7.01221資源名稱: 蕈狀芽胞桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>97%,進(jìn)分sigma貨號(hào)A3656 鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白試劑盒乙氧基白屈菜紅堿; 5-Ethoxych
: 65092442資源名稱: 羊布氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白試劑盒異夏佛塔苷;Isoschaftoside
阿爾瑪藍(lán)乙二胺四乙二鈉鋅鹽
其他 乙二胺四乙鋅二鈉;EDTA二鈉鋅
英文名稱: Disodium zinc ethylenediaminetetraacetate tetrahydrate
產(chǎn)品規(guī)格: AR,98%
包裝:100克
CAS號(hào):176736-49-5
C10H12N2O8ZnNa2•4H2O=471.64
級(jí)別:AR
含量:≥98.0%
干燥失重:14~16%
free zinc:≤0.01%
heavy metals:<0.001%
性狀:粉末
用途:生化研究。絡(luò)合劑。食品、油脂、飲料的色澤穩(wěn)定劑。調(diào)味劑
保存:RT
操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)