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商品介紹:
本探針是常用的細(xì)胞膜熒光探針之一,呈現(xiàn)綠色熒光。DiO是一種親脂性膜染料,進(jìn)入細(xì)胞膜后可以側(cè)向擴(kuò)散逐漸使整個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞膜被染色。DiO在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱,僅當(dāng)進(jìn)入到細(xì)胞膜后才可以被激發(fā)出很強(qiáng)的熒光。DiO被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光,DiO和磷酯雙層膜結(jié)合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。其中,大激發(fā)波長(zhǎng)為484nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為501nm。 |
CAS:34215-57-1
分子式:C53H85ClN2O6
分子量:881.72
DiO可以溶解于無水乙醇、DMSO和DMF,溶解度約為1-2.5mg/ml。發(fā)現(xiàn)較難溶解時(shí)可以適當(dāng)加熱,并用超聲處理以促進(jìn)溶解。
DiO被廣泛用于正向或逆向的,活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長(zhǎng)期示蹤劑(long-term tracer)。DiO通常不會(huì)明顯影響細(xì)胞的生存力(viability)。DiO對(duì)于細(xì)胞膜染色的熒光強(qiáng)度通常要低于DiI,有時(shí)對(duì)于某些經(jīng)過固定的組織的染色效果欠佳。
DiO除了簡(jiǎn)單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外,還可以用于檢測(cè)細(xì)胞的融合和粘附,檢測(cè)發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移,通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測(cè)脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散,檢測(cè)細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。
用于細(xì)胞膜熒光標(biāo)記時(shí),DiO的常用濃度為1-30μM,常用的濃度為5-10μM。DiO可以直接染色活的細(xì)胞或組織,染色時(shí)間通常為5-20分鐘。對(duì)于固定的細(xì)胞或組織,通常宜使用配制在PBS中的4%多聚進(jìn)行固定,使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?huì)導(dǎo)致熒光背景較高。
注意事項(xiàng):熒光染料均存在淬滅問題,請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
儲(chǔ)存條件:4℃避光,有效期一年。
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
無磷二氫鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ambrisentan磷化D酪激衰減蛋白2抗體包裝5g
無磷氫二鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ambrisentan磷化D酪激衰減蛋白2抗體包裝1g
無味霉A晶型(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dronedarone HCL膀胱癌缺失基因1包裝1g
無味霉B晶型(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dronedarone磷化膀胱癌缺失基因1抗體包裝1g
西吡銨(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ranolazine HCl多巴受體D4抗體包裝5g
西洛多辛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ranolazine HCl橋粒斑蛋白1抗體包裝1g
西米替?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lercanidipine HCl橋粒斑蛋白2抗體包裝250mg
西尼地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lercanidipine HCl多巴受體D5抗體包裝5g
西沙必利(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Promethazine Hydrochloride脫氧尿嘧啶三磷核苷解抗體包裝1g
西替利雜質(zhì)A(1-[(4-)基]哌)(標(biāo)準(zhǔn)...英文名稱: Agomelatine多巴受體D3抗體包裝5g
昔萘沙美特羅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Agomelatine誘捕受體3抗體包裝1g
烯酰嗎啉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Piracetam多巴轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白DAT抗體包裝1g
腺嘌呤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ramelteon誘捕受體2抗體包裝5g
腺嘌呤核苷(腺苷)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lacosamide腫瘤調(diào)亡/死亡受體5抗體包裝1g
腺嘌呤鹽鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Milnacipran 核心蛋白聚糖抗體包裝5g
酵母菌Saccharomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)微管相關(guān)蛋白2試劑盒三白草;sauchinone
凍土毛霉Mucor│hiemalis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3B試劑盒2-O-alpha-L-鼠李吡喃糖甙鳶尾
青霉屬Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP,BR,可用于培養(yǎng)微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3A試劑盒尚含雞納甙;Quinovin
細(xì)胞膜綠色熒光探針(DiO)溴化金
其他 三溴化金
英文名稱: Gold tribromide
其他英文名稱: Gold(III)bromide; Auric bromide
產(chǎn)品規(guī)格: BR,99%
包裝:1克/5克
CAS號(hào):10294-28-7
AuBr3=436.68
級(jí)別:BR
含量:≥99.0%
性狀:棕黑色粉末。對(duì)光敏感。有吸濕性。溶于水成紅棕色溶液,溶于乙和甘油,但逐漸被還原成金屬。熔點(diǎn)約160℃(分解)。有腐蝕性。
用途:生化研究。測(cè)定有機(jī)堿和某些生物堿
保存:RT,避光
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。