操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱(chēng):內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針
英文名稱(chēng):Endoplasmic Reticulum Tracker Red
產(chǎn)品規(guī)格:20μl
發(fā)貨周期:1~3天
本探針是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針,可以用于活細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性熒光染色。本探針為采用的BODIPY TR進(jìn)行了熒光標(biāo)記的glibenclamide,分子量為915.23。
Glibenclamide即glyburide,中文名為格列苯脲,是一種2型糖尿病治療藥物,可以結(jié)合主要定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的sulphonylurea受體。因此熒光標(biāo)記的glibenclamide就可以用作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性的熒光探針。 |
本探針對(duì)于細(xì)胞的毒性極低。而傳統(tǒng)的DiOC6(3)對(duì)ER染色的同時(shí)也對(duì)細(xì)胞有一定的毒性。本探針呈紅色熒光,檢測(cè)時(shí)的大激發(fā)波長(zhǎng)為587nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為615nm。
本探針按照后附的使用說(shuō)明染色后,用等固定后染色效果可以被部分保留。本品提供了探針稀釋液,使本探針的使用更加便捷。按照1:1000的比例稀釋?zhuān)梢耘渲?0ml探針工作液;按照1:3000的比例稀釋?zhuān)梢耘渲?0ml探針工作液。
儲(chǔ)存條件:-20℃避光,有效期6個(gè)月。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
香草(熔點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Milnacipran雙特異性磷2抗體包裝10MG
香蘭,香草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Tetrabenazine21號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框106抗體包裝250mg
香葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Tetrabenazine同源轉(zhuǎn)錄因子DLX5抗體包裝1g
消旋卡多曲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): VigabatrinDVL3蛋白抗體包裝1g
消旋瑞格列奈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): O-Desmethylvenlaine(DL)DNA依賴(lài)蛋白激催化亞基抗體包裝250mg
消旋山莨菪堿雜質(zhì)Ⅰ(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): FlumethasoneGADD153抗體包裝1g
消旋鹽替羅非班(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Flumethasone中間絲蛋白β-synemin抗體包裝250mg
硝地平雜質(zhì)ⅠI(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Ritodrine HClMAP激激活死亡域蛋白4C抗體包裝1g
硝地平雜質(zhì)Ⅰ(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Ritodrine HCl橋粒糖蛋白4抗體包裝1g
硝呋酚酰肼;硝呋奇特(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Indinavir sulfate動(dòng)力蛋白3抗體包裝5g
硝呋太爾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Tazobactam sodiumδ連環(huán)蛋白/δ連環(huán)/δ鏈接(δ-catenin)抗體包裝100ml
硝基呋喃烯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Tazobactam sodium胞漿接頭蛋白Dok6抗體包裝1g
硝普鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): D-Cycloserine胞漿接頭蛋白Dok5抗體包裝25g
硝奧昔康唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): D-Cycloserine癌中心體相關(guān)蛋白抗體包裝5g
硝(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Tetracycline hydrochlorideDCAF13蛋白抗體包裝1g
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品微管微絲交聯(lián)因子1試劑盒雙草鹽;4-Amino-4-Me
: CGMCC1.291資源名稱(chēng): 蠟狀芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP6.8微管多特異性有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2試劑盒圣草酚;Eriodictyol
: 43224資源名稱(chēng): 堪薩斯分枝桿菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品微管多特異性有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1試劑盒α-三聯(lián)噻吩;α-Terthiophen
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針溴化鉀
其他 鉀溴;灰鉀
英文名稱(chēng): Potassium bromide
其他英文名稱(chēng): bromide salt of potassium
產(chǎn)品規(guī)格: SP,99%
包裝:10克
產(chǎn)品規(guī)格: AR,99%
包裝:500克
CAS號(hào):7758-02-3
KBr=119.0
級(jí)別:SP
含量:≥99.0%
pH(50g/L,25℃):5.5~8.5
氯化物:≤0.05%
澄清度試驗(yàn):合格
硫鹽:≤0.002%
溴鹽:≤0.001%
碘化物:≤0.005%
水不溶物:≤0.001%
陽(yáng)離子:合格
級(jí)別:AR
含量:≥99.0%
pH(50g/L,25℃):5.5~8.5
總氮量:≤0.001%
氯化物:≤0.2%
水不溶物:≤0.005%
重金屬(以Pb計(jì)):≤0.0002%
鈉:≤0.02%
鎂:≤0.0005%
鈣:≤0.002%
鐵:≤0.0002%
鋇:≤0.002%
性狀:無(wú)色結(jié)晶粉末。有強(qiáng)烈咸味。見(jiàn)光色變黃。稍有吸濕性。1g溶于1.5ml水、1ml沸水、4.6ml甘油、250ml乙,水溶液呈中性。相對(duì)密度(d254)2.75。熔點(diǎn)730℃。沸點(diǎn)1435℃。有刺激性。
用途:生化研究。點(diǎn)滴分析測(cè)定銅及銀。極譜分析銦、鎘和砷。顯影劑。農(nóng)藥分析
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