中文名稱:細(xì)胞凋亡檢測試劑盒IV(FITC+POD)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:20T
發(fā)貨周期:1~3天
保存條件:-20℃冰凍保存。
保存期:一年
工作原理:
在機(jī)體內(nèi)部隨時(shí)都在發(fā)生著細(xì)胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細(xì)胞的死亡,其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚,時(shí)間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活,細(xì)胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割,出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口,并產(chǎn)生與 DNA 斷點(diǎn)數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標(biāo)記的dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記至 3’-OH 末端,DIG-dUTP 結(jié)合在 DNA 斷點(diǎn)部位,可以通過生物標(biāo)記的抗抗體(Anti-DIG-Biotin)反應(yīng)后,再結(jié)合熒光素 FITC或者過氧化物酶 POD 標(biāo)記的鏈酶親和素(SABC-FITC/SABC-POD)。FITC 在 490-495nm 激化,在 520-530nm 發(fā)射熒光,在熒光顯微鏡下呈明亮黃綠色。POD的在加入顯色底物 DAB 顯色后,凋亡的細(xì)胞核呈棕黃色。用戶根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,在不同切片上用兩套不同顯示系統(tǒng)觀察。
|
試劑盒內(nèi)容:
1.標(biāo)記緩沖液(Labeling Buffer)1ml
2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl
3.DIG-dUTP(×20)20μl
4.封閉液(Blocking Reagent)4ml
5.生物素化抗抗體(× 100)20μl
6.SABC-FITC(× 100)20μl
7.SABC-POD(× 100)20μl
8.Proteinase K(×200)50μl
9.抗體稀釋液 4ml
10.未染色陽性對照片 2 張。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
補(bǔ)體1抑制因子(C1INH)elisa試劑盒英文名稱:C1INH ELISA Kit9號染色體開放閱讀框86抗體包裝5g
補(bǔ)體1q(C1q)elisa試劑盒英文名稱:C1q ELISA Kit鈣粘附分子18抗體包裝25g
酮脫氫磷(PDP)elisa試劑盒英文名稱:PDP ELISA KitCD276抗體包裝5g
酮脫氫激同工4(PDK4)elisa試劑盒英文名稱:PDK4 ELISA Kit21號染色體開放閱讀框25抗體包裝1g
酮脫氫β(PDHβ)elisa試劑盒英文名稱:PDHβ ELISA Kit22號染色體開放閱讀框36抗體包裝5g
酮脫氫α(PDHα)elisa試劑盒英文名稱:PDHα ELISA Kit補(bǔ)體組分1q子成分樣蛋白1抗體包裝1g
酮羧化(PC)elisa試劑盒英文名稱:PC ELISA KitCD44抗體包裝25g
糖磷異構(gòu)1(TPI1)elisa試劑盒英文名稱:TPI1 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框114抗體包裝5g
別孕烯酮(AP)elisa試劑盒英文名稱:AP ELISA KitCD8β鏈(CD8-β)抗體包裝100mg
表皮轉(zhuǎn)谷酰胺(TGM3)elisa試劑盒英文名稱:TGM3 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框1抗體包裝25g
表皮調(diào)節(jié)(EREG)elisa試劑盒英文名稱:EREG ELISA Kitγ晶狀體蛋白S/γS-crystallin抗體包裝5g
表皮生長因子受體2(EGFR2)elisa試劑盒英文名稱:EGFR2 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框72抗體包裝25g
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白D(SPD)elisa試劑盒英文名稱:SPD ELISA Kit鈣粘附分子10抗體包裝5g
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白A(SPA)elisa試劑盒英文名稱:SPA ELISA KitR Cadherin/CDH4包裝25g
表睪酮(ET)elisa試劑盒英文名稱:ET ELISA Kit大鼠細(xì)小病H-1株(H-1)抗體包裝5g
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR幽門螺旋菌IgG試劑盒乙酰蝙蝠葛蘇林堿;O-diacetyld
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品幽門螺旋桿菌IgM試劑盒一葉萩堿;Securinine
膠孢刺盤孢Colletotrichum│gloeosporioides 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR硬骨試劑盒異葒草; Homoorientin
細(xì)胞凋亡檢測試劑盒IV(FITC+POD)乙二胺四乙
其他 四乙二基乙烯;托立龍;四乙二基乙烯;維爾烯;乙底;依地
英文名稱: EDTA
其他英文名稱: Ethylenediaminetetraacetic acid;Edetic acid;(Ethylenedinitrilo)tetraacetic acid;Edathamil
產(chǎn)品規(guī)格: AR,99.5%
包裝:250克
CAS號:60-00-4
C10H16N2O8=292.25
級別:AR
含量:≥99.5%
硫鹽:≤0.05%
碳鈉溶液溶解試驗(yàn):合格
氯化物:≤0.05%
鐵:≤0.001%
重金屬:≤0.001%
灼燒殘?jiān)?/span>≤0.1%
性狀:粉末。溶于氫氧化鈉、碳鈉和溶液中,溶于160份沸水,微溶于冷水,不溶于乙和一般有機(jī)溶劑。能與堿金屬、稀土元和過渡金屬等形成極穩(wěn)定的水溶性絡(luò)合物。熔點(diǎn) 240℃(分解)。有刺激性
用途:生化研究。絡(luò)合劑。血液抗凝劑。生化研究中消除重金屬對催化反應(yīng)的抑制作用。洗滌劑。掩蔽劑
保存:RT
操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)