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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：溫和氣單胞菌PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-02R6483
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品分類：水產(chǎn)養(yǎng)殖病害檢測(cè)系列（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
visfatin ELISA Kit 大鼠內(nèi)脂/內(nèi)臟脂肪Multi-class antibodies： 48T
TRBF1/TRF1 端粒體復(fù)制結(jié)合因子1抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh GIRK3/KCNJ9 G蛋白激活內(nèi)向鉀通道3抗體 0.1ml
NP-Y(Human neuropeptide Y) ELISA Kit 人神經(jīng)肽Y 96T
NRARP NOTCH調(diào)節(jié)錨蛋白抗體 0.2ml
ARIP2a 激活受體2A抗體 0.2ml
TRBF1/TRF1 端粒體復(fù)制結(jié)合因子1抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Human histone H2A-H2B-DNA autoantibody ELISA Kit 人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體Multi-class antibodies： 48T
Insulin 胰島蛋白抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh LIR-8/CD85c/LILRB5 白細(xì)胞球蛋白樣受體8抗體 0.2ml
PC/CPG(Human choline phosphoglyceride) ELISA Kit 人膽磷甘油酯 96T
RMND1 減數(shù)分裂同源蛋白1抗體 0.2ml
C12ORF29 12號(hào)染色體開放閱讀框29抗體 0.2ml
Insulin 胰島蛋白抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rabbit chicken IgM/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗雞IgM 0.1ml
GANAB α葡萄糖苷2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ADAMTSL1 整合樣金屬蛋白與樣1蛋白抗體 0.2ml
MAdCAM-1/FITC 熒光標(biāo)記粘膜血管定居因子抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit chicken IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗雞IgG 0.1ml
TBX3/FITC 熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)錄因子Tbx3抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
溫和氣單胞菌PCR檢測(cè)試劑盒細(xì)胞牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）20次大鼠通道蛋白0elisa檢測(cè)試劑盒
pcr試劑盒大鼠胃動(dòng)elisa檢測(cè)試劑盒
組織牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）20次大鼠B6elisa檢測(cè)試劑盒
pcr試劑盒大鼠超敏C反應(yīng)蛋白elisa檢測(cè)試劑盒
血液牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）20次大鼠透明質(zhì)elisa檢測(cè)試劑盒
pcr試劑盒大鼠胰蛋白elisa檢測(cè)試劑盒
體液牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）20次小鼠破骨分化因子elisa檢測(cè)試劑盒
pcr試劑盒小鼠C反應(yīng)蛋白elisa檢測(cè)試劑盒
通用型牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）20次小鼠球蛋白Aelisa檢測(cè)試劑盒
定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒小鼠白介1βelisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）20次大鼠補(bǔ)體蛋白4elisa檢測(cè)試劑盒
定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒大鼠D3elisa檢測(cè)試劑盒
組織牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）20次大鼠雌二醇受體elisa檢測(cè)試劑盒
定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒大鼠抗Ⅲ抗體elisa檢測(cè)試劑盒
血液牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）20次小鼠肝脂elisa檢測(cè)試劑盒
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