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詳細介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：腸出血性大腸桿菌O157PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：FS-02R6325
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品分類：恒溫熒光法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
實驗過程：
一、試劑準備 1. DNA模板 2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應全部轉移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6.為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7.儀器擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
EMA IgA ELISA Kit 大鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgAMulti-class antibodies： 48T
Tsg101 tsg101抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh GGPS1 法尼基二磷合1抗體 0.2ml
CXCR3(Mouse CXC-chemokine receptor 3) ELISA KIT 小鼠CXC趨化因子受體3 96T
NCX2 鈉鈣交換蛋白2抗體 0.1ml
KAL1 卡爾曼綜合癥基因1抗體 0.2ml
Tsg101 tsg101抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
MCV(Human mutated citrullinated vimentin antibody) ELISA Kit 人抗突變型瓜波形蛋白抗體Multi-class antibodies： 48T
phospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180) 磷化KB抑制蛋白激α抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh MAGEA5 黑色瘤相關抗原5抗體 0.2ml
Lp-PL-A2(Human lipoprotein-associated phospholipase A2) ELISA Kit 人脂蛋白磷脂A2 96T
RNF185 環(huán)指蛋白185抗體 0.2ml
CYP3A4 細胞色P450 3A4抗體 0.1ml
phospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180) 磷化KB抑制蛋白激α抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rabbit Bov IgG/Cy7 Cy7標記的兔抗IgG 0.1ml
GSC 同源盒蛋白GSC抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ACOT8 ?；鵄硫酯8 0.2ml
TPSB2/Tryptase Beta2/FITC 熒光標記兔抗人、大、小鼠肥大細胞類胰蛋白β2IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Biotin/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗生物抗體IgG 0.1ml
TLK1/FITC 熒光標記調(diào)節(jié)染色體組裝激1抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
腸出血性大腸桿菌O157PCR檢測試劑盒通用型豬傳染性胃腸炎/豬呼吸（TGEV/PRCV）20次白色探針法熒光定量PCR試劑盒
基因檢測試劑盒擬桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型豬圓環(huán)病毒（CIRCOVIRUS）基因檢測試劑盒20次長雙歧桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型豬輪狀病毒（Porcine rotavirus）基因檢測試劑盒20次海鷗彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型豬胸膜肺炎（APP）基因檢測試劑盒20次克柔探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型豬副豬嗜血桿菌（HPS）基因檢測試劑盒20次球孢白僵菌探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型豬布病基因檢測試劑盒20次文氏巴爾通體探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型牛Q熱?。≦ Fever）基因檢測試劑盒20次牛皰疹病通用探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型牛腹瀉病毒/臨界病毒（Border Disease；BDV）20次木鼠布魯氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒
基因檢測試劑盒貝氏貝諾孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型牛新孢子蟲?。?/span>Neospora caninum）基因檢測試劑盒20次耳探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）20次脆弱擬桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
pcr試劑盒大腸彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
細胞牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV）20次葡萄孢菌探針法熒光定量PCR試劑盒
pcr試劑盒對蝦桿狀病探針法熒光定量PCR試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
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