ATCC細(xì)胞基本原理：
  

 ATCC細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出現(xiàn)細(xì)胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向**母細(xì)胞轉(zhuǎn)化.**細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低可以反映機(jī)體的細(xì)胞**水平,因此可作為測(cè)定機(jī)體**功能的指標(biāo)之一.
ATCC細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)有形態(tài)計(jì)數(shù)法、MTT 法和同位素法三種.MTT 法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法.MTT 是一種噻唑鹽,化學(xué)名3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液為黃橙色.小鼠脾細(xì)胞受到ConA 作用后發(fā)生增殖活化,其胞內(nèi)線(xiàn)粒體琥珀酸脫氫酶活性相應(yīng)升高,MTT 作為其底物參與反應(yīng),形成藍(lán)色的甲臜（Formazan）顆粒沉積于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周?chē)?經(jīng)鹽酸─異丙醇溶解后為藍(lán)色溶液,可用酶標(biāo)測(cè)定儀測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)物的OD 值,測(cè)定波長(zhǎng)570nm.根據(jù)OD 值的大小計(jì)算反應(yīng)體系中細(xì)胞增殖程度.

ATCC細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)方法：

1. 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

應(yīng)遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37。5度，取出凍存的細(xì)胞迅速放入后將細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化。

在無(wú)菌臺(tái)內(nèi)將*培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，約5ml左右，然后用無(wú)菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞，置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃，使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

2. 傳代:

對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。

一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞:

懸浮細(xì)胞:

3. 凍存 

將貼壁細(xì)胞消化后離心收集，懸浮細(xì)胞直接離心收集，以*培養(yǎng)基或胎牛血清重懸細(xì)胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過(guò)夜。次日保存到液氮中。