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穩(wěn)定細胞株篩選
閱讀:437 發(fā)布時間:2022-1-27方法一:先把質粒整合到染色體上后,用相應的質粒DNA中的抗性標志來篩選該細胞系,單克隆篩選穩(wěn)定細胞株。
第一步:篩選濃度測定,以10~14 天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度;
第二步:進行細胞接種,轉染實驗前天接種細胞,各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80% 覆蓋;
第三步:進行細胞轉染
第四步:利用質粒上含有的抗性選擇進行篩選,并鑒定篩選結果。
方法二:應用逆轉錄病毒,慢病毒轉染,篩選穩(wěn)定細胞株。慢病毒可以攜帶外源基因隨機整合進基因組。轉染得到穩(wěn)定細胞株的效率高,是建立穩(wěn)定株的*方式。
第一步:將人源化的抗體基因轉接到慢病毒載體上,
第二步:使用包裝細胞,一般為293細胞,包裝出病毒,不同類型病毒包裝時間一般在3-5天。
第三步:用病毒轉染目的細胞。包裝好的病毒要先測滴度,根據滴度決定轉染目的細胞的病毒量。
第四步:后期篩選。轉染目的細胞1-2天后加抗生素篩選得到穩(wěn)定細胞株。