穩(wěn)定細胞株是一種常用于基因表達、藥物篩選和蛋白質(zhì)表達等領域的工具。但是，穩(wěn)定細胞株的篩選需要經(jīng)過一系列的步驟和實驗，下面介紹一下穩(wěn)定細胞株篩選的兩種方法和穩(wěn)定細胞株的篩選簡要步驟：

一、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染法
先把質(zhì)粒整合到染色體上后，用相應的質(zhì)粒DNA中的抗性標志來篩選該細胞系，單克隆篩選穩(wěn)定細胞株。
1、篩選濃度測定，以10~14 天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；
2、進行細胞接種，轉(zhuǎn)染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉(zhuǎn)染當天細胞密度應達到60%~80% 覆蓋；
3、進行細胞轉(zhuǎn)染
4、利用質(zhì)粒上含有的抗性選擇進行篩選，并鑒定篩選結(jié)果。

二、慢病毒轉(zhuǎn)染法：
應用逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒轉(zhuǎn)染，篩選穩(wěn)定細胞株。慢病毒可以攜帶外源基因隨機整合進基因組。轉(zhuǎn)染得到穩(wěn)定細胞株的效率高，是建立穩(wěn)定株的比較不錯的方式。
1、將人源化的抗體基因轉(zhuǎn)接到慢病毒載體上，
2、使用包裝細胞，一般為293細胞，包裝出病毒，不同類型病毒包裝時間一般在3-5天。
3、用病毒轉(zhuǎn)染目的細胞。包裝好的病毒要先測滴度，根據(jù)滴度決定轉(zhuǎn)染目的細胞的病毒量。
4、后期篩選。轉(zhuǎn)染目的細胞1-2天后加抗生素篩選得到穩(wěn)定細胞株。

穩(wěn)定細胞株篩選步驟：
1.構建攜帶目標基因的載體
首先，需要將目標基因克隆到攜帶有選擇標記的載體中，例如含有抗生素抗性基因的質(zhì)粒。然后將該載體轉(zhuǎn)染到目標細胞中。

2.選擇標記篩選
轉(zhuǎn)染后的細胞需要在含有抗生素的培養(yǎng)基中進行篩選。只有成功轉(zhuǎn)染的細胞才能夠在含有抗生素的培養(yǎng)基中生長。

3.穩(wěn)定細胞株的篩選
在完成了選擇標記篩選后，需要對細胞進行進一步的篩選，以得到穩(wěn)定的細胞株。這可以通過對細胞進行單克隆分離來實現(xiàn)。具體地，將轉(zhuǎn)染后的細胞在96孔板中進行單克隆分離，每個孔只保留一個細胞。然后，通過檢測細胞株的表達水平和穩(wěn)定性，篩選出較佳的穩(wěn)定細胞株。

總結(jié)：
穩(wěn)定細胞株的篩選是一個復雜的過程，需要仔細設計和實驗。通過上述步驟，可以篩選出高表達、穩(wěn)定的細胞株，為后續(xù)的實驗和研究提供了有力的支持。

細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構建病毒法：

1、確定目標細胞系的相關信息，細胞的培養(yǎng)條件，細胞的增值速度，支原體污染情況；

2、預實驗確定MOI值，可通過查閱文獻確定慢病毒在目標細胞系中的MOI值也可參考查閱得到的數(shù)據(jù)，設計梯度實驗，摸索最適MOI；

3、預實驗確定篩選藥物用量，常用的藥物篩選有：puro、G418、潮霉素等；

    4、 細胞鋪板，將需要的細胞量接種于合適的培養(yǎng)皿中；

    5、 細胞感染，通過接種的細胞量及預實驗得來的MOI來計算添加的病毒體積；

6、撤病毒，第二天，一般不超過24h換液；

    7、 轉(zhuǎn)染48h后選擇對應的抗性藥物進行篩選；

8、篩選結(jié)束后進行單克隆化，選擇陽性克隆進行培養(yǎng)。