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原代培養(yǎng)技術的重點關注事項
閱讀:91 發(fā)布時間:2024-1-8原代培養(yǎng):字面意思即第1次培養(yǎng),但實際上,通常把第1代至第10代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。 原代培養(yǎng)技術的重點關注事項:
一、注意污染
1、嚴格進行動物皮膚消毒,使用三套器械取材。新生動物皮膚先用2%碘酒液消毒,成年鼠先用3%~5%碘酒液消毒后用75%酒精消毒。2、嚴格進行無菌操作,防止細菌、霉菌、支原體污染,避免化學物質(zhì)污染。自取材開始,保持所有組織細胞處于無菌條件。細胞計數(shù)可在有菌環(huán)境中進行。
3、吸取液體前,瓶口和吸管進行火焰消毒;吸取液體時,避免瓶口和吸管碰撞。
4、離心管入臺前,管口、管壁應消毒。
5、實驗者離開超凈臺時,要隨時用肘部關閉工作窗。
6、使用過的器械用酒精棉球擦去血污后,移入另一個器皿中繼續(xù)消毒,在浸泡器械時剪刀口要叉開放,鑷子彎頭要向下放,并加蓋消毒。凡在超凈臺外操作的步驟,各器皿需用蓋子或橡皮塞,以防止細菌落入。
二、器材使用時既要注意用火焰消毒,又要防止燙傷、燙死細胞。經(jīng)火焰消毒后的吸管一定要用Hanks液冷卻。
三、超凈臺內(nèi)溫度、濕度較大,在夏天工作時臺內(nèi)散熱更慢,因此進行細胞懸液混勻、接種時,離火焰要稍微遠些,組織細胞、培養(yǎng)液等不能暴露過久,以免溶液蒸發(fā)。