細(xì)胞遷移(Cell migration)：因其類似體外傷口愈合過程，又名傷口愈合實(shí)驗(yàn)(Wound healing assay)，是指細(xì)胞在接收到遷移信號(hào)或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動(dòng)。它是一種廣泛建立的研究體外集體細(xì)胞遷移的技術(shù)。。細(xì)胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。

      基本原理：在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域，稱為“劃痕/傷口"，劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕/傷口"愈合，于細(xì)胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像，通過測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)的劃痕間距并計(jì)算差值，可對(duì)細(xì)胞的遷移能力做出判斷。

       條件好的實(shí)驗(yàn)室可以使用活細(xì)胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)中角質(zhì)形成細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移活動(dòng)。結(jié)合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時(shí)間的速度。使用延時(shí)顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點(diǎn)是，可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。

   

       通常，用于傷口愈合試驗(yàn)的細(xì)胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細(xì)胞系和原代細(xì)胞經(jīng)常被用作這方面的模型。蕞常用的細(xì)胞類型是角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

1.學(xué)習(xí)：了解實(shí)驗(yàn)的目的、實(shí)驗(yàn)所用試劑耗材、實(shí)驗(yàn)基本操作和注意事項(xiàng)、結(jié)果分析等。

2.耗材：六孔板、馬克筆、直尺、200ul槍頭、PBS、wan全培養(yǎng)基等。

3.規(guī)劃：根據(jù)所用細(xì)胞生長速度和所需定點(diǎn)拍照時(shí)間提前規(guī)劃實(shí)驗(yàn)。建議在做實(shí)驗(yàn)之前進(jìn)行一次預(yù)實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)步驟：  

1.劃線：于六孔板底面，馬克筆順直尺畫三條橫線作為標(biāo)記線。

2.種板：根據(jù)分組種板，細(xì)胞密度為5x105個(gè)/孔左右。并務(wù)必鋪勻。

3.劃痕：待細(xì)胞長滿后，用直尺比著，200ul槍頭垂直于孔板和畫的標(biāo)記線劃兩條垂線，使劃痕與標(biāo)記線相交，可以形成若干交叉點(diǎn)，作為固定的檢測(cè)點(diǎn)。

4.清洗：棄去舊培養(yǎng)基，用PBS輕輕潤洗兩到三次，直到劃下來的細(xì)胞沖洗干凈。

5.加液：根據(jù)分組分別加入加藥培養(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基。

6.拍照觀察：劃痕、清洗、加液完成后，用顯微鏡拍不同倍數(shù)的照片，作為0h對(duì)照。放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在所需時(shí)間點(diǎn)取出細(xì)胞，于顯微鏡下觀察同一位置劃痕寬度并拍照。

7.數(shù)據(jù)分析：一種是統(tǒng)計(jì)細(xì)胞遷移的距離，一種是統(tǒng)計(jì)劃痕面積。都可以用ImageJ軟件來進(jìn)行分析。

那么制作劃痕實(shí)驗(yàn)需要注意事項(xiàng)：

1. 細(xì)胞的密度；劃痕實(shí)驗(yàn)一般是幾種細(xì)胞的結(jié)合，但是每種細(xì)胞的生長速度會(huì)不一樣，所以需要按照細(xì)胞的生長特性調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間，細(xì)胞鋪滿孔底時(shí)劃痕的效果會(huì)比較好，建議是100%的鋪滿。

2. 用槍頭畫線時(shí)盡量垂直，以6孔板為例 ，一個(gè)孔可以畫6條線

3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細(xì)胞

4. 注意培養(yǎng)方式一定要改成無血清或者低血清的培養(yǎng)基，因?yàn)椋簞澓酆笥脽o血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，意在說明在監(jiān)測(cè)的 24 小時(shí)內(nèi)，劃痕的縮小是細(xì)胞 遷移作用的結(jié)果，所以要將細(xì)胞增殖造成細(xì)胞遷移的影響降到蕞低；但若細(xì)胞改成無血清培養(yǎng)后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%。

5. （5）放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)?？砂?，10，12，15時(shí)間點(diǎn)取樣，拍照(具體時(shí)間依實(shí)驗(yàn)需要而定)。

6. （6）統(tǒng)計(jì)方法：使用Image J軟件打開圖片后，抓取自己畫的線條，計(jì)算細(xì)胞間距離的平均值。