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小鼠17-α甲睪酮(17-αMT)檢測(cè)試劑盒樣品收集和注意事項(xiàng)

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小鼠17-α甲睪酮(17-αMT)檢測(cè)試劑盒樣品收集:

1. 血清:全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原,無(wú)內(nèi)毒素試管。
2. 血漿:抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè)。避免使用溶血,高血脂樣品。
3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測(cè)。
5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè)
6. 樣品應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。
7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),避免反復(fù)凍融。
8. 如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋?zhuān)ńㄗh先做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù))。

小鼠17-α甲睪酮(17-αMT)檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng):

(1).實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
(2).試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
(3).使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。(4).不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
(5).洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
(6).使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
(7).加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
(8).按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
(9).底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

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