豬托克特諾病毒PCR檢測試劑盒操作說明

  今日立冬，深秋的江南已漸有寒意，常綠的喬木已在不經(jīng)意間換上了金色的冬裝，南渡的雁雀急揮著翅膀匆匆南飛，偶爾有落單的鳥兒一邊悲鳴著一邊奮力的前行，仿佛在訴說著同伴們的無情與現(xiàn)實(shí)的無奈，甚怕稍稍慢些就會被南下的寒流凍成冰棍，金色的稻田已經(jīng)被勤勞的農(nóng)民搶收完畢，看上去空蕩蕩的，只剩下幾顆狼尾草在飄搖，秋風(fēng)越來越大膽了，開始變得肆無忌憚起來，卷起那一地又一地金黃色的梧桐葉，毫不憐香惜玉的把她拋向天空，再吹落到各個(gè)角落直至粉碎化成泥土!接下來介紹豬托克特諾病毒PCR檢測試劑盒操作說明

產(chǎn)品特點(diǎn):

PCR引物設(shè)計(jì)的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA序列。因此，引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。

要設(shè)計(jì)引物首先要找到DNA序列的保守區(qū)。同時(shí)應(yīng)預(yù)測將要擴(kuò)增的片段單鏈?zhǔn)欠裥纬啥壗Y(jié)構(gòu)。如這個(gè)區(qū)域單鏈能形成二級結(jié)構(gòu)，就要避開它。如這一段不能形成二級結(jié)構(gòu)，那就可以在這一區(qū)域設(shè)計(jì)引物。

現(xiàn)在可以在這一保守區(qū)域里設(shè)計(jì)一對引物。一般引物長度為15-30堿基，擴(kuò)增片段長度為100-600堿基對。

讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般為40%-60%。而且四種堿基的分布隨機(jī)。不要有聚嘌呤或聚嘧啶存在。否則P1引物設(shè)計(jì)的就不合理。應(yīng)重新尋找區(qū)域設(shè)計(jì)引物。

同時(shí)引物之間也不能有互補(bǔ)性，一般一對引物間不應(yīng)多于4個(gè)連續(xù)堿基的互補(bǔ)。

引物確定以后，可以對引物進(jìn)行必要的修飾，例如可以在引物的5′端加酶切位點(diǎn)序列；標(biāo)記生物素、熒光素、等，這對擴(kuò)增的特異性影響不大。但3′端不能進(jìn)行任何修飾，因?yàn)橐锏难由焓菑?′端開始的。這里還需提醒的是3′端不要終止于密碼子的第3位，因?yàn)槊艽a子第3位易發(fā)生簡并，會影響擴(kuò)增的特異性與效率。

引物的設(shè)計(jì)原則：

1、引物應(yīng)用核酸系列保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)并具有特異性。

2、 產(chǎn)物不能形成二級結(jié)構(gòu)。

3、引物長度一般在15~30堿基之間。

4、G+C含量在40%~60%之間。

5、堿基要隨機(jī)分布。

6、引物自身不能有連續(xù)4個(gè)堿基的互補(bǔ)。

7、引物之間不能有連續(xù)4個(gè)堿基的互補(bǔ)。

8、引物5′端可以修飾。

9、引物3′端不可修飾。

10、引物3′端要避開密碼子的第3位。