小鼠胰島β細胞關(guān)于細胞移植的功效

重點在于其分泌的促增殖或抗凋亡的細胞因子,羊水干細胞能否分泌相關(guān)細胞因子有必要深入分析。

目的:觀察分離培養(yǎng)的羊水干細胞分泌細胞因子情況,及其對人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖和凋亡的作用。

設(shè)計、時間及地點:細胞學體外觀察,于2008-12/2009-06在南昌大學附屬醫(yī)院高血壓病研究所完成。材料:10例剖宮產(chǎn)孕婦足月羊水,50mL/例,用于分離培養(yǎng)羊水干細胞,同時留取其產(chǎn)后臍靜脈用于分離培養(yǎng)內(nèi)皮細胞,取前均獲孕婦知情同意。

方法:①貼壁法分離培養(yǎng)羊水干細胞,達80%融合時胰酶消化傳代,取傳至第3代細胞,調(diào)整細胞密度為5×108L-1,分為2組:缺氧羊水干細胞組通入體積分數(shù)為2%O2+體積分數(shù)為5%CO2+體積分數(shù)為93%N2,常規(guī)羊水干細胞組通入體積分數(shù)為5%CO2+體積分數(shù)為95%空氣,兩組細胞37℃培養(yǎng)24h,收集各自培養(yǎng)上清液及細胞以備分析。

②取體外分離培養(yǎng)的第2代人臍靜脈內(nèi)皮細胞,以2×104細胞/孔的密度接種于12孔板,分為3組:對照組加入含體積分數(shù)為5%胎牛血清的EBM-2新鮮培養(yǎng)液2mL,常規(guī)羊水干細胞組加入含體積分數(shù)為5%胎牛血清的EBM-2新鮮培養(yǎng)液1mL+羊水干細胞培養(yǎng)液1mL,缺氧羊水干細胞組加入含體積分數(shù)為5%胎牛血清的EBM-2新鮮培養(yǎng)液1mL+缺氧誘導羊水干細胞培養(yǎng)液1mL,培養(yǎng)3d,加入10μg/L腫瘤壞死因子α誘導細胞凋亡。

主要觀察指標:流式細胞儀測定羊水干細胞表面抗原表達,ELISA法測定羊水干細胞分泌血管內(nèi)皮細胞生長因子、肝細胞生長因子情況,RT-PCR法測定細胞因子mRNA的表達,檢測內(nèi)皮細胞增殖率及凋亡率。

結(jié)果:培養(yǎng)7d后羊水干細胞呈長梭形,以漩渦狀、輻射狀排列,第3代羊水干細胞呈CD29+,CD105+,CD34-。

常規(guī)培養(yǎng)的羊水干細胞可分泌血管內(nèi)皮細胞生長因子、肝細胞生長因子;缺氧誘導條件下血管內(nèi)皮細胞生長因子水平明顯增加(P0.01),其mRNA表達明顯上調(diào)(P0.05),而肝細胞生長因子含量及mRNA的表達均無明顯變化(P0.05)。

與對照組比較,培養(yǎng)3d后常規(guī)羊水干細胞組、缺氧羊水干細胞組內(nèi)皮細胞數(shù)均明顯增加(P0.05),腫瘤壞死因子α誘導凋亡24h后內(nèi)皮細胞凋亡率均明顯降低(P0.05),且缺氧羊水干細胞組變化幅度大于常規(guī)羊水干細胞組(P0.05)

。結(jié)論:羊水干細胞可分泌血管內(nèi)皮細胞生長因子、肝細胞生長因子,羊水干細胞培養(yǎng)液能促進內(nèi)皮細胞增殖,抑制內(nèi)皮細胞凋亡。經(jīng)缺氧處理后,羊水干細胞分泌血管內(nèi)皮細胞生長因子的能力增加,對內(nèi)皮細胞的增殖和凋亡干預作用增強。