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大鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)

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  • 大鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)

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更新時(shí)間:2023-04-21 14:55:18瀏覽次數(shù):250

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn) 組織來(lái)源 骨髓
大鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)的相關(guān)產(chǎn)品:山羊乳腺上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基500ML豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基100ML豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基500ML人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基100ML人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基500ML

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

組織來(lái)源

大鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

骨髓

商品詳細(xì)介紹:

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:

分離自骨髓;骨髓是機(jī)體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用,白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細(xì)菌、病毒等;某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時(shí),紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細(xì)胞增多,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細(xì)胞是由骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的;樹(shù)突狀細(xì)胞分為成熟樹(shù)突狀細(xì)胞和未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞,典型的未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞呈半貼壁生長(zhǎng),在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,亦可見(jiàn)少量短刺狀突,胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見(jiàn)吞噬泡,具有較強(qiáng)的遷移能力,伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞,貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞由未成熟DC進(jìn)一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導(dǎo)而成,多數(shù)呈懸浮生長(zhǎng), 細(xì)胞呈圓形,細(xì)胞體積進(jìn)一步增大,表面大量粗細(xì)不等的樹(shù)枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞。未成熟DC細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細(xì)胞尚無(wú)特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志,主要通過(guò)形態(tài)學(xué)、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。其中成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié);未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,不能激活T細(xì)胞的第二信號(hào),可導(dǎo)致T細(xì)胞無(wú)能,從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低,一般在30%以下。

5.方法簡(jiǎn)介:

實(shí)驗(yàn)室分離的采用密度梯度離心法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞、培養(yǎng)過(guò)程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè):

實(shí)驗(yàn)室分離的經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細(xì)胞形態(tài)等綜合鑒定,純度可達(dá)80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性  半貼半懸浮

細(xì)胞形態(tài)  圓形,樹(shù)突狀

傳代特性  屬于高度分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

1.png

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

二、免疫熒光鑒定:


   1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大?。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

 

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

PSTK蛋白抗體 微管相關(guān)絲氨/蘇氨激3封閉多肽 人銜接活化因子1(APAF1) ELISA試劑盒

肌微管相關(guān)蛋白10抗體 DUS2L蛋白封閉多肽 人錨蛋白B(Ank-B)試劑盒 ELISA

果糖-2,6-二磷3/磷果糖激2抗體 血紅蛋白γ2封閉多肽 人潛伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA檢測(cè)試劑盒

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白92抗體 線粒體核糖體蛋白L42封閉多肽 人重組激活基因2(RAG-2) ELISA Kit

細(xì)胞角蛋白31抗體 活化受體4封閉多肽 人重組激活基因1(RAG-1)ELISA試劑盒

玻璃粘連蛋白抗體 磷化脂肪細(xì)胞型脂肪結(jié)合蛋白 人NOD樣受體(NLR)試劑盒 ELISA

PARD6G蛋白抗體 核糖體蛋白S8封閉多肽 人視黃誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體(RLR) ELISA檢測(cè)試劑盒

FAM59B蛋白抗體 低密度脂蛋白受體的誘導(dǎo)降解蛋白封閉多肽 人清道夫受體B(SRB/CD36)ELISA Kit

英文名稱: Caspase-3 單核細(xì)胞趨化蛋白2封閉多肽(小鼠) 人殺菌肽B(CecB) ELISA試劑盒

突觸結(jié)合蛋白樣蛋白4抗體 伸長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白封閉多肽 人抗菌肽(Att) 試劑盒 ELISA

軸絲動(dòng)力蛋白重鏈9抗體 泛激活E1封閉多肽 人顆粒溶(GNLY) ELISA檢測(cè)試劑盒

水通道蛋白-7抗體 附睪特異蛋白15封閉多肽 人富組蛋白(HTN5)ELISA Kit

鈣介質(zhì)抗體 果糖-2,6-二磷3/磷果糖激2封閉多肽 樣轉(zhuǎn)錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)ELISA試劑盒

體激活因子PA28γ抗體 磷化絲裂原活化蛋白激激8封閉多肽 人絲狀血球凝集(FHA)試劑盒 ELISA

離子型谷氨受體1抗體 磷化孕激受體封閉多肽 人細(xì)胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(CVL)ELISA檢測(cè)試劑盒

心血管發(fā)育中胚層相關(guān)蛋白1抗體 嗅覺(jué)受體52J3封閉多肽 人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)A(CyPA)ELISA Kit

酰基轉(zhuǎn)移2抗體 CD30封閉多肽 人肌養(yǎng)蛋白(dystrophin)ELISA試劑盒

雙重特異性磷27抗體 鋅指蛋白313封閉多肽 人膠原凝集(Collectin)試劑盒 ELISA
大鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)小鼠腎足細(xì)胞英文名稱:小鼠腎足細(xì)胞5×105提供免疫熒光鑒定報(bào)告

小鼠輸尿管上皮細(xì)胞英文名稱:小鼠輸尿管上皮細(xì)胞5×105提供免疫熒光鑒定報(bào)告

小鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞英文名稱:小鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞5×105提供免疫熒光鑒定報(bào)告

小鼠膀胱上皮細(xì)胞英文名稱:小鼠膀胱上皮細(xì)胞5×105提供免疫熒光鑒定報(bào)告

小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞英文名稱:小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞5×105提供免疫熒光鑒定報(bào)告

小鼠膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞英文名稱:小鼠膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞5×105提供免疫熒光鑒定報(bào)告

小鼠前列腺上皮細(xì)胞英文名稱:小鼠前列腺上皮細(xì)胞5×105提供免疫熒光鑒定報(bào)告

 


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