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大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞

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更新時(shí)間:2023-04-21 11:46:20瀏覽次數(shù):288

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn) 組織來源 鞏膜組織
大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品:SU-DHL-2人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞  人細(xì)胞系1×106SU-DHL-4人B淋巴瘤細(xì)胞 人細(xì)胞系1×106sv-huc-1人膀胱上皮永生化細(xì)胞人細(xì)胞系1×106SW982 [SW-982]人滑膜肉瘤細(xì)胞人細(xì)胞系1×106SW1116人結(jié)腸腺癌細(xì)胞人細(xì)胞系1×106

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

組織來源

大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

鞏膜組織

商品詳細(xì)介紹:

4.細(xì)胞簡介:

分離自鞏膜組織,鞏膜是眼球壁的主要組成之一。是眼球纖維膜的后5/6部分。前方聯(lián)接角膜,后方與視神經(jīng)的鞘膜延續(xù)。鞏膜在視神經(jīng)穿出部附近厚,愈前愈薄,在肌腱附著處又復(fù)增厚。其與角膜交界處,外面有環(huán)形的角膜溝,深部有鞏膜靜脈竇。小兒的鞏膜為淺藍(lán)色,成年為白色,老年因脂肪沉著而帶黃色。鞏膜結(jié)構(gòu)堅(jiān)韌,有支持和保護(hù)眼內(nèi)組織的作用。成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來;成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

5.方法簡介:

實(shí)驗(yàn)室分離的采用混合膠原消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測:

實(shí)驗(yàn)室分離的經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  貼壁

細(xì)胞形態(tài)  成纖維細(xì)胞樣

傳代特性  可傳2-3代左右

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

1.png

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大?。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

 

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

氧固醇結(jié)合蛋白樣6抗體 磷化干擾誘導(dǎo)的雙鏈RNA活化蛋白激封閉多肽 人鳥苷解離抑制因子(GDI)ELISA試劑盒

PATL2蛋白抗體 可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2B1封閉多肽 人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)試劑盒ELISA

孕激受體抗體 NT5C3蛋白封閉多肽 人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2A)ELISA檢測試劑盒

滑膜細(xì)胞凋亡抑制物1抗體 Toll樣受體銜接蛋白TICAM2封閉多肽 人脫氧尿三磷(DUTP)elisa試劑盒

英文名稱: BST2 重組人S100B蛋白 人協(xié)同刺激分子受體(CMR)試劑盒elisa

英文名稱: Di-Methyl-Histone H3 (Lys27) 半乳糖凝集相關(guān)蛋白GRP封閉多肽 人肽聚糖(PG)檢測試劑盒elisa

生長抑受體1抗體 核苷結(jié)合蛋白2封閉多肽 人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)ELISA試劑盒

磷化腎上腺能受體β2/β2-AR抗體 溶質(zhì)載體家族39成員11封閉多肽 人甘露糖(MN)試劑盒ELISA

FAS凋亡抑制分子3抗體 細(xì)胞壁合成蛋白43封閉多肽 人甘露糖受體(MR)ELISA檢測試劑盒

SEC14樣蛋白L3抗體 鋅指蛋白641封閉多肽 人未甲基化寡聚脫氧核苷(CpG-ODN)elisa試劑盒

質(zhì)膜囊泡相關(guān)蛋白抗體 9號(hào)染色體開放閱讀框84封閉多肽 人甲酰甲硫氨(fMet)試劑盒elisa

微管蛋白特定伴侶蛋白E抗體 天冬氨家族蛋白封閉多肽 人ICE激活因子(IRAP)檢測試劑盒elisa

γ 谷氨酰半胱氨連接調(diào)節(jié)亞基抗體 催乳調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白PREB封閉多肽 人非甲基化寡核苷(NON)ELISA試劑盒

TBX22蛋白抗體 細(xì)胞分裂周期蛋白7封閉多肽 人蛋白Z(ProteinZ)試劑盒ELISA

2’,3’-環(huán)腺苷-3’-磷二酯抗體 狂躁基因同源蛋白MFNG封閉多肽 人蛋白S(ProteinS)ELISA檢測試劑盒

唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集11抗體 磷化T細(xì)胞活化連接蛋白封閉多肽 人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)elisa試劑盒

CD200受體抗體 磷化沉默調(diào)節(jié)蛋白1封閉多肽 人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)試劑盒elisa

英文名稱: Phospho-PKR (Thr446) 磷化絲裂原活化蛋白激3封閉多肽 人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ)檢測試劑盒elisa
大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞SV40-MES-13小鼠腎小球系膜細(xì)胞英文名稱:SV40-MES-131×106D/F12+10%FBS+1%P/S(STR鼠源鑒定)報(bào)告

SVEC4-10小鼠淋巴結(jié)血管上皮樣細(xì)胞 英文名稱:SVEC4-101×106DMEM+10%FBS+1%P/S (STR鼠源鑒定)報(bào)告

TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞英文名稱:TC-11×1061640+10% FBS+1%P/S(STR鼠源鑒定)報(bào)告

TCMK-1小鼠腎小管上皮細(xì)胞英文名稱:TCMK-11×106MEM+10%FBS+1%P/S (STR鼠源鑒定)報(bào)告

TM3小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞英文名稱:TM31×106DMEM/F12+2.5%FBS+5%馬血清+1%P/S (STR鼠源鑒定)報(bào)告

TM4正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞英文名稱:TM41×106DMEM/F12+2.5%FBS+5%馬血清+1%P/S (STR鼠源鑒定)報(bào)告

U14小鼠子宮頸癌細(xì)胞英文名稱:U141×106DMEM +10%FBS+1%P/S(STR鼠源鑒定)報(bào)告

 


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