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大鼠胚肺成纖維細(xì)胞

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更新時間:2023-04-21 15:53:02瀏覽次數(shù):210

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實驗 組織來源 胚胎;肺組織
大鼠胚肺成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品:大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞原代細(xì)胞5×105大鼠肝Kupffer細(xì)胞原代細(xì)胞5×105大鼠結(jié)腸神經(jīng)元細(xì)胞原代細(xì)胞5×105大鼠肝間質(zhì)細(xì)胞原代細(xì)胞5×105大鼠肝成纖維細(xì)胞原代細(xì)胞5×105

詳細(xì)介紹

商品詳細(xì)介紹:

4.細(xì)胞簡介:

分離自胚肺組織;肺是機體的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆蓋于心之上。肺有分葉,左二右三,共五葉。肺經(jīng)肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連,故稱喉為肺之門戶,鼻為肺之外竅。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的胚肺成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細(xì)胞在合成和分泌細(xì)胞因子、維持血管內(nèi)外和凝血和纖溶的的動態(tài)平衡中起重要作用。

5.方法簡介:

實驗室分離的采用胰dan白 - 膠原混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測:

實驗室分離的經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  貼壁

細(xì)胞形態(tài)  成纖維細(xì)胞樣

傳代特性  可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

組織來源

大鼠胚肺成纖維細(xì)胞

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

胚胎;肺組織

1.png

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

 

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

磷化原癌基因蛋白18 整合樣金屬與13型封閉多肽 

熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗體 肽基脯氨酰順反異構(gòu)FKBP11封閉多肽 

α1微球蛋白單克隆抗體 離子通道蛋白Kv3.3封閉多肽 

磷化KLF5抗體 B細(xì)胞活化因子受體(CD268)封閉多肽 

FBXW8蛋白抗體 胎盤生長因子封閉多肽 

細(xì)胞色P450 19抗體 CD350封閉多肽 

HHIP蛋白抗體 重組乙肝病毒核心抗原 

C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體 核孔復(fù)合蛋白Nup53封閉多肽 

白細(xì)胞介27β抗體 短鏈L-3羥烷基脫氫封閉多肽 

甲基化樣蛋白21D抗體 重組腫瘤抑制基因P53/野生型P53蛋白 

乳腺癌易感基因2抗體 痙攣性截癱相關(guān)蛋白20封閉多肽 

DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄樣蛋白4抗體 DTWD1蛋白封閉多肽 

羥基類固醇脫氫3α/3α-羥類固醇脫氫Ⅰ抗體 染色質(zhì)修飾蛋白CHMP7封閉多肽 

分泌型免疫球蛋白A抗體 8號染色體開放閱讀框30a封閉多肽 

英文名稱: Valine 磷化原癌基因c-Raf封閉多肽 

CARD9抗體 胰島β細(xì)胞生長因子封閉多肽 

Cy7標(biāo)記小鼠抗人CD45單克隆抗體 磷化一氧化氮合成3(內(nèi)皮型)封閉多肽 

α1微球蛋白單克隆抗體 抑制βB/Inhibin β B封閉多肽  
大鼠胚肺成纖維細(xì)胞原代T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系英文名稱:原代T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系500mL

原代基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系英文名稱:原代基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系100mL

原代基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系英文名稱:原代基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系500mL

原代卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)體系英文名稱:原代卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)體系100mL

原代卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)體系英文名稱:原代卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)體系500mL

原代肥大細(xì)胞培養(yǎng)體系英文名稱:原代肥大細(xì)胞培養(yǎng)體系100mL

原代肥大細(xì)胞培養(yǎng)體系英文名稱:原代肥大細(xì)胞培養(yǎng)體系500mL
操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 


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