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大鼠角膜上皮細(xì)胞

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更新時(shí)間:2023-04-23 11:07:50瀏覽次數(shù):239

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn) 組織來源 眼角膜組織
大鼠角膜上皮細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品:LTEP-a-2 (人肺腺癌細(xì)胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶小鼠附睪上皮細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶HELF (人胚肺成纖維細(xì)胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶小鼠支氣管上皮細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

組織來源

大鼠角膜上皮細(xì)胞

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

眼角膜組織

商品詳細(xì)介紹:

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:

分離自眼角膜組織;角膜位于眼球前壁的一層透明膜,約占纖維膜的前1/6,從后面看角膜呈正圓形,從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同,中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢,如有外物接觸角膜,眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明,角膜并沒有血管,透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層,由前向后依次為:上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。其主要功能如下:①角膜是的無血管的組織,具有透明的特性和合成許多蛋白的功能,分三層細(xì)胞層,外層即是上皮細(xì)胞;②角膜上皮細(xì)胞能參與先天性免疫,能感應(yīng)病原體存在并發(fā)出信號(hào)從而激活角膜防御系統(tǒng);③角膜上皮細(xì)胞能高效表達(dá)醛脫氫。角膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)對(duì)研究角膜的生理學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)都是極為重要的手段,常用于研究細(xì)胞代謝產(chǎn)物、病毒感染、各種生長(zhǎng)因子和藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。

5.方法簡(jiǎn)介:

實(shí)驗(yàn)室分離的采用胰dan白-膠原混合消化法結(jié)合差速貼壁法,并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè):

實(shí)驗(yàn)室分離的經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性  貼壁

細(xì)胞形態(tài)  上皮細(xì)胞樣

傳代特性  可傳1-2代

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

1.png

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

 

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

濾泡型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/II型慢性淋巴性白血病抗體 鋅指蛋白854封閉多肽 

谷草轉(zhuǎn)氨2抗體 淋巴細(xì)胞特異性接頭蛋白封閉多肽 

A型H1N1流感病毒神經(jīng)氨抗體 TRIM9蛋白封閉多肽 

嗜粒細(xì)胞趨化蛋白CCL1抗體 真核翻譯起始因子4B封閉多肽 

交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Goose, Zebrafish, Sheep, GPV, Firefly, Bee, Belt Jellyfish, Fish, GuineaPig, Hamster, Shrimp, Fruit Fly, Goat, Monkey, Cat, Donkey, Duck, Chimpanzee, Arabidopsis Thalian 吞噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)蛋白2封閉多肽 

DNAJC28蛋白抗體 11號(hào)染色體開放閱讀框21封閉多肽 

組胺受體H1抗體 磷化氨基末端激1/2/3封閉多肽 

熱休克蛋白90α抗體 三磷腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2封閉多肽 

BCL2相關(guān)蛋白A1抗體 干擾α受體2封閉多肽 

英文名稱: Human Tau-4 SLU7蛋白封閉多肽 

強(qiáng)啡肽抗體 細(xì)胞粘附分子CD112封閉多肽 

人泌乳單克隆抗體 磷化原癌基因c-Raf封閉多肽 

交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Goose, Zebrafish, Sheep, GPV, Firefly, Bee, Belt Jellyfish, Fish, GuineaPig, Hamster, Shrimp, Fruit Fly, Goat, Monkey, Cat, Donkey, Duck, Chimpanzee, Arabidopsis Thalian 抑癌基因p16/p14/P19封閉多肽 

轉(zhuǎn)錄因子Sp2抗體 過氧化活化增生受體γ封閉多肽 

激活受體2B抗體 CD307a封閉多肽 

英文名稱: CLDN7 莫洛尼白血病病毒10樣蛋白1封閉多肽 

NACAD蛋白抗體 核糖體S6蛋白激β2封閉多肽 

磷化樁蛋白Paxillin抗體 磷化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1封閉多肽 
大鼠角膜上皮細(xì)胞EB-3 (人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)(STR鑒定正確)RPMI-1640+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

豬成骨細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

C918 (人眼脈絡(luò)黑色瘤細(xì)胞) (STR鑒定正確)RPMI-1640+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

人膀胱成纖維細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

MFC (小鼠胃癌細(xì)胞) (種屬鑒定正確)RPMI-1640+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

SNB-19 (人膠質(zhì)瘤細(xì)胞) (U-251 MG污染細(xì)胞系,)DMEM+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

786-O [786-0] (人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞) (STR鑒定正確)RPMI-1640+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

 


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