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小鼠肺成纖維細胞

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更新時間:2023-04-21 15:02:48瀏覽次數(shù):250

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實驗 組織來源 肺組織
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詳細介紹

1.png

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

組織來源

小鼠肺成纖維細胞

5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

肺組織

商品詳細介紹:

4.細胞簡介:

分離自肺組織;肺是機體的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆蓋于心之上。肺有分葉,左二右三,共五葉。肺經(jīng)肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連,故稱喉為肺之門戶,鼻為肺之外竅。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來;成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質(zhì)透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括:構造和維持肺器官的正常形態(tài),合成和釋放細胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。

5.方法簡介:

實驗室分離的采用胰dan白 - 膠原混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測:

實驗室分離的經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  貼壁

細胞形態(tài)  成纖維細胞樣

傳代特性  可傳3-5代

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大?。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

 

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
   2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
   5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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小鼠肺成纖維細胞小鼠髓核細胞英文名稱:小鼠髓核細胞5×105提供免疫熒光鑒定報告

小鼠破骨細胞英文名稱:小鼠破骨細胞5×105提供化學染色報告

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小鼠角質(zhì)形成細胞英文名稱:小鼠角質(zhì)形成細胞5×105提供免疫熒光鑒定報告

小鼠表皮干細胞英文名稱:小鼠表皮干細胞5×105提供免疫熒光鑒定報告

小鼠前脂肪細胞英文名稱:小鼠前脂肪細胞5×105提供免疫熒光鑒定報告

小鼠脂肪微血管內(nèi)皮細胞英文名稱:小鼠脂肪微血管內(nèi)皮細胞5×105提供免疫熒光鑒定報告


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