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小鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞

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更新時(shí)間:2023-04-21 16:39:39瀏覽次數(shù):189

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn) 組織來(lái)源 肺動(dòng)脈組織
小鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品:小鼠脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代細(xì)胞5×105小鼠脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞原代細(xì)胞5×105小鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代細(xì)胞5×105小鼠牙周膜成纖維細(xì)胞原代細(xì)胞5×105小鼠牙周膜干細(xì)胞原代細(xì)胞5×105

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

組織來(lái)源

小鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

肺動(dòng)脈組織

商品詳細(xì)介紹:

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:

分離自肺動(dòng)脈組織;肺動(dòng)脈亦稱(chēng)肺動(dòng)脈干。在呼吸空氣的脊椎動(dòng)物中,把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動(dòng)脈。肺大動(dòng)脈起于右心室,在主動(dòng)脈之前向左上后方斜行,在主動(dòng)脈弓下方分為左、右肺動(dòng)脈,經(jīng)肺門(mén)入肺。肺動(dòng)脈干位于心包內(nèi),為一粗短的動(dòng)脈干。起自右心室,在升主動(dòng)脈前方向左后上方斜行,至主動(dòng)脈弓下方分為左、右肺動(dòng)脈。左肺動(dòng)脈較短,在左主支氣管前方橫行,分二支進(jìn)入左肺上、下葉。右肺動(dòng)脈較長(zhǎng)而粗,經(jīng)升主動(dòng)脈和上腔靜脈后方向右橫行,至右肺門(mén)處分為三支進(jìn)入右肺上、中、下葉。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái);成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開(kāi)始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長(zhǎng),不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長(zhǎng),平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括:構(gòu)造和維持肺動(dòng)脈的正常形態(tài);合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì);組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。

5.方法簡(jiǎn)介:

實(shí)驗(yàn)室分離的采用胰dan白 - 膠原混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè):

實(shí)驗(yàn)室分離的經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性  貼壁

細(xì)胞形態(tài)  成纖維細(xì)胞樣

傳代特性  可傳3代左右

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

1.png

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

二、免疫熒光鑒定:


   1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

 

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

白細(xì)胞介28A抗體 磷化核苷交換因子VAV3封閉多肽 

DNA聚合ι/DNA pol ι抗體 乳腺癌增強(qiáng)蛋白2封閉多肽 

Smad7單克隆抗體 磷化白介2受體β鏈封閉多肽 

信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白WD重復(fù)蛋白2抗體 鋅指蛋白238封閉多肽 

整合αL抗體 重組人心肌肌鈣蛋白I 

磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 鋅指蛋白14封閉多肽 

淋巴細(xì)胞特異性接頭蛋白抗體 磷化KB抑制蛋白激β封閉多肽 

結(jié)蛋白抗體 磷化轉(zhuǎn)錄因子3封閉多肽 

TNRC6C 周斑蛋白封閉多肽 

G蛋白偶聯(lián)受體81抗體 動(dòng)力相關(guān)蛋白1封閉多肽 

磷脂?;嫉鞍拙厶?/span>1抗體 驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員24封閉多肽 

鋅指蛋白423抗體 磷化粘著斑激封閉多肽 

脫氫還原14抗體 抑癌基因p16封閉多肽 

褐黑相關(guān)蛋白ART抗體 重組豬藍(lán)耳病病毒N蛋白 

Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白4抗體 細(xì)胞色b5還原3封閉多肽 

核仁和紡錘體相關(guān)蛋白1抗體 葡萄糖激封閉多肽 

核孔蛋白188抗體 蛋白質(zhì)磷2調(diào)節(jié)亞基5D/PP2A-B56-δ封閉多肽 

RYK單克隆抗體 鉀離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白7封閉多肽 
小鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基100mL豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基由技術(shù)團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試,本產(chǎn)品可保持豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞佳的生長(zhǎng)狀態(tài)。本產(chǎn)品中已包含豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分,無(wú)需添加任何成分,可直接用于豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

大鼠肌腱干細(xì)胞培養(yǎng)基100mL大鼠肌腱干細(xì)胞培養(yǎng)基由技術(shù)團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試,本產(chǎn)品可保持大鼠肌腱干細(xì)胞佳的生長(zhǎng)狀態(tài)。本產(chǎn)品中已包含大鼠肌腱干細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分,無(wú)需添加任何成分,可直接用于大鼠肌腱干細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

小鼠外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基100mL小鼠外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基由技術(shù)團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試,本產(chǎn)品可保持小鼠外周血淋巴細(xì)胞佳的生長(zhǎng)狀態(tài)。本產(chǎn)品中已包含小鼠外周血淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分,無(wú)需添加任何成分,可直接用于小鼠外周血淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

大鼠外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基100mL大鼠外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基由技術(shù)團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試,本產(chǎn)品可保持大鼠外周血淋巴細(xì)胞佳的生長(zhǎng)狀態(tài)。本產(chǎn)品中已包含大鼠外周血淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分,無(wú)需添加任何成分,可直接用于大鼠外周血淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

McCoy's 5A培養(yǎng)基(含HEPES、10%FBS)125mL×4McCoy's 5A培養(yǎng)基是Thomas McCoy等人在1959年設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基,初專(zhuān)門(mén)用于Novikoff Hepatoma細(xì)胞的培養(yǎng)。McCoy's 5A培養(yǎng)基是改良的Basal Medium 5A,與其他培養(yǎng)基不同的是,McCoy's 5A含有還原型、細(xì)菌蛋白胨以及高濃度的葡萄糖。McCoy's 5A廣泛用于多種類(lèi)型的原代細(xì)胞的培養(yǎng),如骨髓、皮膚、牙齦、腎、脾、肺、大鼠胚胎、網(wǎng)膜等。此外McCoy's 5A培養(yǎng)基還用于組織活檢培養(yǎng)、細(xì)胞建系,以及一些淋巴細(xì)胞和較難培養(yǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng)。

小鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL小鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基由技術(shù)團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試,本產(chǎn)品可保持小鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞佳的生長(zhǎng)狀態(tài)。本產(chǎn)品中已包含小鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分,無(wú)需添加任何成分,可直接用于小鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

DMEM低糖(不含鈉)500mL-

 


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