-20℃ 避光

1.避免反復凍融。
2.可以根據(jù)需要分裝后凍存。
3.探針為DMSO溶液，在2-8℃時是固體狀態(tài)，冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

6個月

熒光分光光度計或熒光酶標儀

血清

1.使用方便：可用熒光分光光度計、熒光酶標儀檢測； 2.背景低，靈敏度高； 3.線性范圍寬，使用方便。

1.熒光分光光度計或熒光酶標儀，
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒

PBS緩沖液或者HBSS

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
4.熒光檢測專用黑色96孔板

1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。? 2.熒光探針標記后，一定要洗凈殘余的未進入細胞內(nèi)的探針，否則會導致背景較高。
3.探針標記完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認探針的標記情況是否正常。
4.盡量縮短探針標記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。
5.原位檢測必須使用熒光檢測專用的黑色透明底96孔細胞培養(yǎng)板。
6.以下操作步驟僅供參考，請根據(jù)實際樣本情況調(diào)整或參考文獻。

試劑準備： 根據(jù)樣本數(shù)量，用純水將O72探針10倍稀釋。充分混勻，配制成探針工作液，備用。 【注】： ?不可以一次性將探針全部稀釋。 ?現(xiàn)配現(xiàn)用。 ?也可以不稀釋探針，直接在待檢測血清樣品中加入1-2 μl探針，但是需要用好的移液器和吸頭，注意操作過程，保證探針有效的加入了樣品中，并充分混勻。 樣本檢測： 1.在96孔板中加入100微升新鮮血清樣本、10-20微升O72探針工作液，用移液器吹打，使之充分混勻。 【注】： ?注意選擇合適的96孔板，熒光檢測需要使用黑色板。 ?不同樣本的活性氧差異較大，需要根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果調(diào)整探針用量。一般加入2-10 μl探針，染色終濃度按試劑盒中探針母液的200-1000倍稀釋，200倍稀釋適合大多數(shù)樣本。 ?如果熒光強度太強，超過了檢測儀器的量程，可以減少探針用量。保證所有樣本探針用量一致即可。 ?以酶標儀檢測為例。也可以用熒光分光光度計檢測，根據(jù)所使用儀器決定液體體積和染色容器。 2.在37℃避光孵育15-30分鐘。 3.置于熒光光度計或酶標儀中，后于激發(fā)波長為516 nm、發(fā)射波長606 nm檢測熒光強度。 【注】： ?必須使用熒光檢測專用的黑色96孔板。 ?如果熒光強度太強，超過了儀器的檢測范圍，可以將孵育后的勻漿上清液稀釋后再檢測。一般稀釋5-50倍。 ?熒光強度強則過氧亞硝基陰離子（ONOO–）含量高。 ?可以用實驗中對照血清的熒光強度值為基準，待測組血清的熒光強度值占對照血清的百分比來比較過氧亞硝基陰離子（ONOO–）程度差異。

?Xiqing Cheng et al. Biomimetic Metal–Organic Framework Composite-Mediated Cascade Catalysis for Synergistic Bacteria Killing ACS Applied Materials & Interfaces 2020 （IF=8.758）