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當前位置:Bio-Techne>>技術文章>>Namocell的單細胞分選效率
引言
在單克隆細胞培養(yǎng)時,手動有限稀釋法是經(jīng)典的分離單細胞手段之一。這種方式分離單細胞,每個孔中落進去的細胞數(shù)目符合泊松分布。依靠單細胞分選儀器分離單細胞的效率,無論從分選能力還是重復性都要明顯優(yōu)于手動的有限稀釋方法。測定一款設備分選效率的標準方法,是用熒光校準微球來分選檢驗。
實驗方法
Namocell單細胞分離儀通過檢測FITC熒光信號,來分選熒光校準微球(Spherotech)和用Calcein AM(Thermo Fisher Scientific)染色的CHO-S細胞。對于分離的細胞可以用Calcein AM染色,用于區(qū)分碎片、死細胞和活細胞,然后可以根據(jù)Namocell推薦的操作流程分離單個活細胞。為了去除細胞結團,在染色之后可以用40um左右的細胞篩網(wǎng)過濾細胞,盡量保證在上樣的時候樣本都是單個細胞。作為對照,我們采用1cell/well的細胞密度進行手動有限稀釋法鋪板。然后,用顯微鏡在明場下觀察每個孔的細胞(或者微球)的數(shù)量。同樣的實驗持續(xù)7天,每天做一組對比實驗,后取平均值。通過統(tǒng)計孔板中單細胞、兩個細胞和空孔的數(shù)量來衡量儀器的分選效率。
實驗結論
在圖例中展示了,用Namocell單細胞分離儀分離的微球和細胞以及手動鋪板的數(shù)據(jù)對比。通過Namocell單細胞分離儀分選的熒光微球保持了很好的一致性---單細胞97%,兩個細胞1%,空白2%。通過Namocell單細胞分離儀分選的細胞樣本---單細胞93%,兩個細胞2%,空白5%。對照樣本數(shù)據(jù),通過手動有限稀釋法得到的分選效率---單細胞31%,兩個細胞35%,空白34%。
在細胞樣本的分散程度比較好的狀態(tài)下,機器分離的高單細胞比例是97%。對于手動有限稀釋法而言,實驗的結果一致性比較差(通過標準差可以看出)。綜上所述,Namocell單細胞分離儀的分選效率和一致性要遠優(yōu)于手動有限稀釋法。
圖例:機器分離的微球和細胞的平均分選效率和手動分離的對比。
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