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單細胞分選的使用方法及用途
閱讀：471 發(fā)布時間：2019-9-20
單細胞分選的使用方法及用途
單細胞分選用流式細胞儀將特定的細胞分選出來的技術，在分選前，細胞要被戴上特殊的符號，所用的符號細胞的探針是可以同待分選細胞外表特征性蛋白（抗原）結(jié)合的抗體，而這種抗體又可以同某種熒光染料結(jié)合。
當結(jié)合有熒光染料的探針與細胞群溫育時，探針就會同具有特異外表抗原的細胞緊緊結(jié)合，因為抗體的結(jié)合，被結(jié)合的細胞帶上了熒光符號，細胞被符號之后，除掉游離的抗體，并將細胞進行稀釋。當稀釋的細胞進入超聲波振蕩器時，極稀的細胞懸浮液形成很小的液滴，一個液滴中只含有一個細胞。液滴一旦形成并經(jīng)過激光束時，激光束激發(fā)結(jié)合在細胞外表抗體分子成為一種標簽。
當液滴逐一經(jīng)過激光束時，受到兩種檢測器的檢測：如果液滴中含有細胞就會激活干涉檢測器，只有帶有熒光符號細胞的液滴才會激活熒光檢測器，當帶有熒光符號的液滴經(jīng)過激光束時，將兩種檢測器一起激活，引起液滴充電信號使鞘液帶上負電荷。因為液滴帶有負電荷，移動時就會向正極移動，進入到熒光符號細胞收集器中。單細胞分選請用50%的條件培養(yǎng)基，并將血清的比重提高到20%，條件培養(yǎng)基就是用過的培養(yǎng)基， 里面會含有細胞因子和其他分泌物， 這有助細胞存活。
如果是含有非熒光符號細胞的液滴進入激光束，只會被干涉檢測器檢測到，成果使充電信號將液滴的鞘液帶上正電荷，從而在移動時偏向負極，被非熒光符號細胞收集器所收集。如果是不含有單細胞分選的液滴進入激光束，則不會被任何檢測器所檢測，因此不會產(chǎn)生充電信號，液滴的鞘液不會帶上任何電 荷，所以在移動時不受任何影響直接進入非檢測的收集器。
單細胞分選的原理其實跟分析相似，也是由鞘液帶去給激光分析，根據(jù)所染的熒光來得出結(jié)果，而分選的不同就是細胞在經(jīng)過激光后也會經(jīng)過噴嘴，單個細胞會以單液滴的分式流出，再按分析結(jié)果由高壓電板賦予相應的電荷，將其分選到不同的收集管中。單細胞分選有不同大小的噴嘴，噴嘴越小分選的速度就越快。所以挑選噴嘴要視乎細胞的大小，一般來說噴嘴需要比細胞大4-6倍。如果選的噴嘴太小，會令細胞容易受壓 失去活性，也會影響分選的穩(wěn)定性。