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淺析單細胞分離的主要應(yīng)用和特點

時間:2020/7/15閱讀:517
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  單細胞分離是一種從待分離的材料中直接分離單個細胞進行培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)的方法,該法在顯微鏡下操作,對于體積較大的微生物,可以用毛細管提取微生物個體;對較小的細胞或孢子,可以用顯微針、鉤、環(huán)等挑取以獲得單細胞;也可將適當稀釋后的樣品制成小液滴,在顯微鏡下選取只含有一個細胞的液滴培養(yǎng)。
  單細胞分離快速高效接種單個活細胞至微孔板,主要功能為高效柔和地分離或分選活的單細胞,該系統(tǒng)通過微流控技術(shù)柔和地形成細胞液滴,同時利用白光和熒光成像實時分析細胞數(shù)量和熒光強度,將符合要求的單細胞液滴準確接種至96孔板或384孔板等微孔板中。
    整合分離過程中避免液體剪切力、電壓、超聲等影響,以維持高細胞存活率,減少對細胞的脅迫壓力,便于后續(xù)培養(yǎng)或分析,主要應(yīng)用包括細胞株開發(fā)、稀有細胞分離、單細胞基因組測序和單細胞RNA測序等。
  高通量單細胞分離系統(tǒng):白光系統(tǒng),根據(jù)細胞直徑、圓度的形態(tài)指標篩選特定細胞;白光+熒光系統(tǒng),根據(jù)細胞直徑、圓度以及熒光強度篩選特定細胞。
  主要特點:
  1、分離效率>85%,單細胞活率>75%;
  2、記錄分離前后的連續(xù)5張圖像,用于支持細胞株的單克隆性;
  3、采用一次性分離槽,省卻系統(tǒng)的清洗驗證,交叉污染的風險;
  4、采用白光成像和熒光成像,可根據(jù)細胞直徑、圓度以及熒光強度篩選出感興趣的細胞;
  5、內(nèi)置除靜電裝置,消除微孔板靜電,確保細胞液滴接種至微孔正中間,尤其是PCR板。
 

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