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單克隆篩選方法和途徑介紹
閱讀：4030 發(fā)布時間：2021-8-21
單克隆篩選是將免疫小鼠的脾細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞結(jié)合成雜交瘤細(xì)胞，是新一代細(xì)胞克隆篩選和挑取技術(shù)，篩選系統(tǒng)能夠更少時間里，快速高效篩選挑取雜交瘤克隆，建立穩(wěn)定細(xì)胞株，干細(xì)胞及特殊表面標(biāo)記細(xì)胞挑取及昆蟲細(xì)胞篩選挑取。
篩選方法有有限稀釋法，半固體培養(yǎng)基挑選法，以及流式細(xì)胞術(shù)挑選法等，這其中有好多需要關(guān)注的點，例如挑選細(xì)胞的參數(shù)，挑選方法本身對細(xì)胞的損傷等，所以說，一個高效的篩選方法絕對能讓工作效率提高好幾倍。
有限稀釋法是目前常用的一種常規(guī)方法，這種方法篩選細(xì)胞的好處就是基本上不會傷害細(xì)胞，整個過程中細(xì)胞所經(jīng)歷的，也僅僅是在移液槍頭中的短暫停留，因此幾乎是零損傷。不過，這種方法的弊端也是顯而易見，就是效率問題。
首先是鋪板效率，雖然不到一分鐘能將一塊96孔板鋪滿，但是一般來說96孔中有細(xì)胞的概率在2/3左右，其中單個細(xì)胞的概率就更小了，這些細(xì)胞要經(jīng)過一段時間的生長，抗體分泌之后，在其上清液中去檢測抗體含量，流程耗時太長，且效率低下，但是在沒有設(shè)備的時候，這還是目前好的選擇。
其次，半固體培養(yǎng)基篩選克隆可以從明場和熒光方面觀察克隆形成情況以及克隆表達量相關(guān)情況，不過類似設(shè)備一般價格比較昂貴，使用成本較高，通量較低。因此，慢慢地很多用戶都不采用類似的設(shè)備進行雜交瘤的單克隆篩選。
另外，就是使用流式細(xì)胞分選儀進行單克隆篩選。流式作為細(xì)胞檢測分選的常用設(shè)備，也有用戶拿來做單克隆篩選。流式分選單細(xì)胞的速度很快，差不多2min左右可以鋪完一塊96孔板；同時，也可以通過熒光篩選細(xì)胞，將表達量高的細(xì)胞篩選下來。但是流式分選在這個應(yīng)用上也有不足之處，主要是：1. 流式的分選壓力較大，一般有70psi左右的鞘液壓力施加在細(xì)胞上，導(dǎo)致分選后的細(xì)胞活性差，往往較難生長；2. 流式共用管路，導(dǎo)致細(xì)胞之間存在交叉污染；3. 流式操作復(fù)雜，開始分選前往往需要一個多小時進行儀器調(diào)節(jié)校準(zhǔn)；4. 儀器體積較大，無法整機放置于超凈臺，容易造成染菌等情況。
Namocell單細(xì)胞分離儀為單克隆篩選提供了一個更好的選擇。一次性芯片，保證樣本之間*隔離；儀器體積小巧，可置于超凈臺中 高效分選：96孔板分選不到1min，384孔板4min以內(nèi)，單克隆率超過95%輕松分選：儀器操作簡單，無需操作維護。