本期我們將為您提供優(yōu)化 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件的指南，及有關(guān)該主題的常見(jiàn)問(wèn)題。

Nucleofector™ I 或 II 條件與4D-Nucleofector™ X 單元兼容度

4D-Nucleofector™ 系統(tǒng)基于升級(jí)后的 Nucleofector™ 技術(shù)，主要改進(jìn)如下：

• 兩種 Nucleofection™ 體系(20ul和100ul)，且實(shí)驗(yàn)條件可以互相轉(zhuǎn)移

• Nucleocuvette™ 由導(dǎo)電聚合物而非鋁組成，提高了細(xì)胞活力

• 簡(jiǎn)化的 4D-Nucleofector™ 試劑

• 更廣泛的程序來(lái)微調(diào)您的優(yōu)化

由于這些差異，為 Nucleofector™ I 或 II 設(shè)備的解決方案對(duì) 4D-Nucleofector™ 系統(tǒng)無(wú)效。然而，在 4D-Nucleofector™ X 單元上運(yùn)行優(yōu)化是一個(gè)潛在改善 Nucleofection™ 結(jié)果的機(jī)會(huì)。

可以優(yōu)化哪些參數(shù)

在 Nucleofection™ 優(yōu)化中，重要的參數(shù)是 Nucleofector™ 試劑和程序。

使用什么底物進(jìn)行優(yōu)化

無(wú)論您感興趣的底物（質(zhì)粒、siRNA、蛋白質(zhì)或化合物）如何，我們始終建議使用我們的 pmaxGFP™ 載體進(jìn)行優(yōu)化。使用 pmaxGFP™ Vector 進(jìn)行優(yōu)化消除了許多變量，例如底物制備的性質(zhì)和質(zhì)量以及分析時(shí)間。

以什么 Nucleofection™ 體系優(yōu)化

4D-Nucleofector™ X 單元旨在簡(jiǎn)化優(yōu)化步驟。我們建議使用 20 μl Nucleocuvette™ Strips 進(jìn)行優(yōu)化，減少珍貴細(xì)胞的消耗。確定條件后，您可以使用相同的方案，通過(guò)將細(xì)胞數(shù)量和底物數(shù)量乘以 5 來(lái)簡(jiǎn)單地切換到 100 μl Nucleocuvette™。

如何優(yōu)化 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件

當(dāng)您的細(xì)胞沒(méi)有的方案時(shí)，將適用以下三種情況之一：

• 如果沒(méi)有任何可用的建議，則開(kāi)始輪優(yōu)化。幾種 Nucleofector™ 試劑（原代細(xì)胞的 P1 至 P5 和細(xì)胞系的 SE、SF 和 SG）中的每一種都將使用 15 個(gè)不同的程序進(jìn)行測(cè)試。

• 遵循基本的 4D-Nucleofector™ X 單元方案（如果有）。使用少量的程序 (6–7個(gè)) 測(cè)試一個(gè)或兩個(gè) Nucleofector™ 試劑。

• 數(shù)據(jù)庫(kù)描述了 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件和數(shù)據(jù)。您可以選擇測(cè)試它們或返回前兩個(gè)選項(xiàng)之一。

如何進(jìn)一步改善Nucleofection™ 條件

參考下方的優(yōu)化策略，可能會(huì)改善 Nucleofection™ 結(jié)果：

• 在表格中選擇效果好的初始程序（例如 DN-100）。表格中間垂直列出的是輪優(yōu)化中描述的 15 個(gè)程序。

• 使用所選程序左側(cè)的程序來(lái)提高細(xì)胞活力（例如 DH-100）。使用右側(cè)的程序來(lái)提高轉(zhuǎn)染效率（例如 ER-100）