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Lonza 4D-Nucleofector電轉(zhuǎn)百科指南：如何提高電轉(zhuǎn)染效率？

2023-6-16　　閱讀(183)

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在之前的“電轉(zhuǎn)知識(shí)"文章中，我們已經(jīng)了解了轉(zhuǎn)染技術(shù)的起源與發(fā)展，包括各類轉(zhuǎn)染方式的優(yōu)缺點(diǎn)：


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以及在電轉(zhuǎn)方法中，Lonza 4D Nucleofector™平臺(tái)所能提供的設(shè)備型號(hào)：

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Nucleofection™ 核轉(zhuǎn)--5步簡單的操作方案，實(shí)現(xiàn)輕松電轉(zhuǎn)

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那么選擇電轉(zhuǎn)方法后，該如何提高電轉(zhuǎn)染效率呢？Lonza電轉(zhuǎn)技術(shù)專家為大家總結(jié)了以下八點(diǎn)：

1

準(zhǔn)備好加了新鮮培養(yǎng)基的多孔板，并在實(shí)驗(yàn)前于37°C下預(yù)平衡

2

使用傳代次數(shù)少并具有推薦融合度或密度（對(duì)數(shù)生長期）的細(xì)胞

3

針對(duì)于貼壁細(xì)胞，需限制胰蛋白酶暴露時(shí)間，仔細(xì)監(jiān)測細(xì)胞分離情況

4

根據(jù)優(yōu)化方案進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并使用適量細(xì)胞數(shù)；所用細(xì)胞過少可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡率增加，所用細(xì)胞過多可能導(dǎo)致細(xì)胞電轉(zhuǎn)效率降低

5

采用高質(zhì)量DNA，使用內(nèi)毒素去除試劑盒進(jìn)行純化；請(qǐng)通過測定A260:A280比值檢查各質(zhì)粒制備液的純度

6

室溫下以離心速度80-100×g和方案規(guī)定的時(shí)間進(jìn)行離心

7

離心后加入Nucleofector™溶液，混勻溶液/細(xì)胞沉淀制備成單細(xì)胞懸液，避免對(duì)細(xì)胞沉淀進(jìn)行額外操作或用移液器槍頭重復(fù)抽吸

8

Nucleofection™核轉(zhuǎn)后，用核轉(zhuǎn)試劑盒內(nèi)配的一次性移液管在電轉(zhuǎn)耗材中的細(xì)胞頂部加入約500μL預(yù)熱培養(yǎng)基

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輕輕將一次性移液管吸頭置于電轉(zhuǎn)耗材底部，收集細(xì)胞

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將細(xì)胞懸液輕輕接種至制備的多孔板中

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請(qǐng)勿重復(fù)吹吸混合細(xì)胞



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