聯(lián)系電話
上?，|馳儀器有限公司
中級(jí)會(huì)員·6年
- 聯(lián)系人：
- 蘇小姐
- 電話：
- 400-820-3556
- 手機(jī)：
- 18521301252
- 地址：
- 上海市浦東新區(qū)環(huán)科路999弄浦東國(guó)際人才港13號(hào)樓2樓
- 網(wǎng)址：
- www.weichilab.com
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
轉(zhuǎn)染5步驟：
第一步：獲取目標(biāo)細(xì)胞
第二步：混合和結(jié)合
轉(zhuǎn)移至Lonza認(rèn)證的電轉(zhuǎn)杯或電轉(zhuǎn)板條中
第三步：選擇Nucleofector程序，放入電轉(zhuǎn)耗材，按下開始按鈕
第四步：用培養(yǎng)基將電轉(zhuǎn)耗材的細(xì)胞轉(zhuǎn)移出來
第五步：轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)M中。Nucleofectionmm電轉(zhuǎn)后3-8小時(shí)即可檢驗(yàn)
提高核轉(zhuǎn)效率8個(gè)TIPS：
1.準(zhǔn)備好加了新鮮培養(yǎng)基的多孔板，并在實(shí)驗(yàn)前于37°C下預(yù)平衡
2.使用傳代次數(shù)少并具有推薦融合度或密度（對(duì)數(shù)生長(zhǎng)）的細(xì)胞
3.限制胰蛋白酶暴露時(shí)間，仔細(xì)監(jiān)測(cè)細(xì)胞分離情況
4.根據(jù)優(yōu)化方案進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并使用適量細(xì)胞數(shù)；所用細(xì)胞過少可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡率增加
5.采用高質(zhì)量DNA，使用內(nèi)毒素去除試劑盒進(jìn)行純化；請(qǐng)通過測(cè)定A260:A280比值檢查各質(zhì)粒制備液的純度
6.室溫下以離心速度80-100×g和方案規(guī)定的時(shí)間進(jìn)行離心
7.離心后加入Nucleofector™溶液，混勻溶液/細(xì)胞沉淀制備成單細(xì)胞懸液，避免對(duì)細(xì)胞沉淀進(jìn)行額外操作或用移液器槍頭抽吸
8.Nucleofection™核轉(zhuǎn)后，用核轉(zhuǎn)試劑盒內(nèi)配的一次性移液管在電轉(zhuǎn)耗材中的細(xì)胞頂部加入約500μL預(yù)熱培養(yǎng)基
