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Q:在哪一步中加入Pannarase全能核酸酶?
A:這取決于您處理的樣本。在病毒純化時(shí)，一般在病毒澄清后加入;大腸桿菌蛋白純化時(shí)，可以在菌體裂解時(shí)就加入;在處理細(xì)胞結(jié)團(tuán)問題時(shí)，可以直接加入培養(yǎng)基中與細(xì)胞共培養(yǎng)。
Q:如果反應(yīng)溫度無法達(dá)到37℃，該如何使用?
A:酶活性受到溫度、處理時(shí)間、酶活單位的影響，如果溫度無法達(dá)到37'C，可以適當(dāng)添加酶的用量，或者延長(zhǎng)孵育時(shí)間。
Q:全能核酸酶是否與蛋白酶抑制劑兼容?
A:可以兼容，但需要注意的是許多蛋白酶抑制劑含有EDTA。EDTA開始高于1 mM時(shí)，EDTA將抑制部分核酸酶的活性。
Q:按照規(guī)定用量添加了全能核酸酶，為什么降解核酸的效果不佳?
A:全能核酸酶的活性受到許多因素的影響。首先，反應(yīng)體系中必須含有1-5 mM的Mg2;此外，如果反應(yīng)體系中單價(jià)陽離子濃度>300 mM、磷酸鹽濃度>100 mM和EDTA濃度>1 mM時(shí)活性會(huì)被抑制。
Q:如何去除全能核酸酶?
A:可以采用多種方式去除。例如深層過濾、切向流過濾、濃縮和透析過濾、色譜層析等方式。
