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近年來，基于核酸的技術(shù)包括mRNA和質(zhì)粒DNA被廣泛地用于遺傳疾病的治療、癌癥預(yù)防，以及疫苗等研究中。與傳統(tǒng)的滅活或減毒活疫苗相比，mRNA疫苗的生產(chǎn)速度相對更快、成本效益更高，而更快的疫苗開發(fā)需要一種高效和快速的檢測方法來監(jiān)測mRNA的純度和完整性。默沙東公司利用LabChip微流控毛細(xì)管電泳來檢測mRNA純度及完整性。
LabChip GXII 系統(tǒng)是Revvity公司（原Perkin Elmer）的，該自動化系統(tǒng)使用“芯片上的實(shí)驗(yàn)室"技術(shù)進(jìn)行電泳。在LabChip上，將含有藍(lán)色熒光染料的凝膠篩分基質(zhì)應(yīng)用于分離通道，然后對樣品進(jìn)行電動注射，使mRNA與熒光染料結(jié)合。施加電壓，mRNA通過凝膠基質(zhì)遷移，按大小進(jìn)行分離，通過熒光檢測觀察mRNA信號。每個(gè)樣本的分離時(shí)間為70秒，覆蓋50-6000 nt的RNA大小，數(shù)據(jù)可以在Waters Empower 3軟件進(jìn)行分析。
結(jié)果展示
作者在分析開發(fā)中主要對樣品制備進(jìn)行了優(yōu)化，樣品處理是通過加入高濃度甲酰胺（>80% v/v），在70°C加熱10 min，以確保mRNA變性。LabChip GXII儀器和試劑盒由Revvity公司提供，并評估標(biāo)準(zhǔn)分析參數(shù)，包括特異性、線性度、準(zhǔn)確性、精密度、LOD和LOQ。該技術(shù)成功用于監(jiān)測不同溫度下LNPs中mRNA的穩(wěn)定性，目前已用于工藝方法開發(fā)。
表1 mRNA完整性分析
總 結(jié)
本文基于芯片的微流控毛細(xì)管電泳系統(tǒng)LabChip，用于評估m(xù)RNA疫苗樣本中mRNA的純度和完整性。芯片可重復(fù)利用；每個(gè)樣品的運(yùn)行是70s，時(shí)間較短，運(yùn)行96孔板大約2.5小時(shí)；并能夠進(jìn)行高通量的樣品分析。
