雙特異性抗體

新型療法，方興未艾

雙特異性抗體（bsAbs）作為一種創(chuàng)新的治療方式，在制藥領(lǐng)域正迅速嶄露頭角。雖然單克隆抗體（mAbs）在過去幾十年里一直是生物制劑領(lǐng)域的主導(dǎo)力量，但bsAbs通過同時(shí)針對(duì)兩種不同的抗原，提供了一種全新的治療機(jī)制。這種能力開辟了新的治療途徑，尤其是在癌癥免疫治療和自身免疫性疾病等領(lǐng)域顯示出巨大潛力。

從2021年到2023年，雙特異性抗體的批準(zhǔn)數(shù)量顯著增加。在2021年之前，全球僅有三種bsAb獲得批準(zhǔn)。然而，從2021年到2023年，新增了11種bsAb療法，使得獲批的bsAb療法名單不斷擴(kuò)充（參見圖1）。

圖1.過去幾年中，經(jīng)監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)并投放市場(chǎng)的bsAb數(shù)量大幅增加[1]。

然而，開發(fā)這些復(fù)雜分子帶來(lái)了挑戰(zhàn)，特別是在確保細(xì)胞株開發(fā) (CLD) 期間的質(zhì)量和產(chǎn)量方面。傳統(tǒng)的CLD工作流程通常會(huì)忽略測(cè)量關(guān)鍵的質(zhì)量屬性，例如正確的異二聚體濃度，或者直到克隆后數(shù)月才進(jìn)行測(cè)量。最近的一項(xiàng)行業(yè)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，只有12%的CLD團(tuán)隊(duì)在將克隆推進(jìn)到攪拌培養(yǎng)階段之前評(píng)估產(chǎn)品質(zhì)量[2]。這種延遲的質(zhì)量評(píng)估增加了推進(jìn)劣質(zhì)克隆的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致成本增加和資源浪費(fèi)。

Beacon®平臺(tái)：CLD的游戲規(guī)則改變者

Beacon®平臺(tái)已成為應(yīng)對(duì)這些挑戰(zhàn)的先進(jìn)集成解決方案。其核心技術(shù)利用光電定位 (OEP) 來(lái)操縱細(xì)胞和微珠，從而將單克隆精確地移動(dòng)進(jìn)入NanoPen®納升小室中進(jìn)行實(shí)時(shí)分析。

這些NanoPen®小室是平臺(tái)的核心。每個(gè)小室在微尺度下運(yùn)行，可容納不到兩納升的液體。如此小的體積創(chuàng)造了一個(gè)高度濃縮的環(huán)境，可以更快、更準(zhǔn)確地檢測(cè)分泌抗體，包括bsAbs。例如，傳統(tǒng)微孔板中需要數(shù)周時(shí)間的測(cè)量，在Beacon®系統(tǒng)上可以在幾小時(shí)到幾天內(nèi)完成。

此外，該平臺(tái)還可精確控制流體條件（例如pH、溫度和培養(yǎng)基成分），從而更接近生物反應(yīng)器環(huán)境。NanoPen®小室層流特性可確保擴(kuò)散（而不是湍流混合）驅(qū)動(dòng)分子的交換，從而實(shí)現(xiàn)高度可控且可靠的測(cè)定[3]。

Beacon®平臺(tái)測(cè)定雙特異性抗體

Beacon®平臺(tái)的主要優(yōu)勢(shì)之一是能夠高精度地篩選bsAbs。對(duì)于需要特定結(jié)合率（例如兩個(gè)不同結(jié)合域的比率為1:1）的雙特異性分子，盡早識(shí)別具有正確異二聚體濃度的克隆至關(guān)重要。使用Beacon®平臺(tái)，您可以測(cè)量擴(kuò)散梯度 (DiGr) 信號(hào)，該參數(shù)與抗體產(chǎn)率直接相關(guān)。

與GSK和Incyte等者的合作證明了這種方法的有效性。在與GSK的一項(xiàng)研究中，使用 Beacon®平臺(tái)測(cè)量了13個(gè)不同的克隆，并與高效液相色譜 (HPLC) 分析進(jìn)行了比較。結(jié)果顯示相關(guān)系數(shù)為0.99，證實(shí)了該平臺(tái)雙特異性測(cè)量的準(zhǔn)確性。

圖2. HPLC分析證實(shí)，使用雙特異性異二聚體測(cè)定法選擇的克隆分泌出預(yù)期的異二聚體百分比。克隆按顏色分為四個(gè)簇，代表不同純度的雙特異性異二聚體分子。A) 抗原測(cè)定的散點(diǎn)圖突出顯示了為 AMBR 發(fā)酵選擇的克隆的分布（三角形）。綠色虛線表示校準(zhǔn)后的Pen Score比率為1。B) 校準(zhǔn)后的Pen Score比率與發(fā)酵培養(yǎng)物測(cè)量的異二聚體百分比的散點(diǎn)圖。

同樣，在與Incyte的合作中，結(jié)果也反映了這些出色的預(yù)測(cè)結(jié)果。為了進(jìn)一步了解這些功能，Incyte 的Shu Wang博士在最近的網(wǎng)絡(luò)研討會(huì)上分享了深入的分析，為bsAb測(cè)量提供了寶貴的觀點(diǎn)。

SpotLight試劑：簡(jiǎn)化bsAb檢測(cè)

2023年，布魯克細(xì)胞分析事業(yè)部推出了SpotLight Human Lambda試劑，進(jìn)一步簡(jiǎn)化了Beacon®平臺(tái)上的bsAb測(cè)量。這一新增功能允許使用布魯克細(xì)胞分析公司提供的現(xiàn)成試劑對(duì)具有Kappa和Lambda輕鏈的抗體進(jìn)行bsAb檢測(cè)[4]（圖3）。

圖 3. SpotLight Human Lambda拓寬SpotLight試劑列表，讓bsAbs的檢測(cè)更加方便。使用SpotLight Human Kappa和Lambda試劑的方法無(wú)需開發(fā)定制試劑來(lái)結(jié)合每條輕鏈，而是為具有兼容分子設(shè)計(jì)的 bsAbs測(cè)量提供了現(xiàn)成的解決方案。

通過使用SpotLight Human Kappa和SpotLight Human Lambda試劑，用戶可以進(jìn)行比率分析以確定每個(gè)結(jié)合域的濃度。這種早期篩選可以在單細(xì)胞克隆后的幾天內(nèi)識(shí)別出產(chǎn)量最高的克隆，替代通常需要數(shù)周或數(shù)月的傳統(tǒng)工作流程。

結(jié)論

Beacon®平臺(tái)正在改變雙特異性抗體的開發(fā)。通過加快從轉(zhuǎn)染到最佳克隆鑒定的時(shí)間線，研究人員現(xiàn)在可以在過程早期測(cè)量異二聚體濃度等關(guān)鍵質(zhì)量屬性。此功能不僅降低了成本和開發(fā)時(shí)間，還提高了開發(fā)高質(zhì)量、高產(chǎn)克隆的可能性，使 Beacon®平臺(tái)成為不斷發(fā)展的雙特異性抗體治療領(lǐng)域工具。