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基質(zhì)膠的概念
基質(zhì)膠是一種模擬細胞外基質(zhì)的生物材料,它能夠為細胞提供必要的支持和信號,影響細胞的行為和功能。它是從富含胞外基質(zhì)蛋白EHS (Engelbreth Holm Swarm)小鼠腫瘤中提取的可溶性基底膜制備物,幾乎包含所有的基底膜成分,能良好模擬基底膜細胞外基質(zhì)的生物學(xué)特性,為生命科學(xué)研究中多種實驗?zāi)P偷臉?gòu)建提供關(guān)鍵生物材料,是類器官培養(yǎng)的重要載體。
基質(zhì)膠主要成分為層粘連蛋白,Ⅳ型膠原蛋白,巢蛋白。同時,基質(zhì)膠也包含多種生長因子,例如表皮生長因子EFG,血小板衍生生長因子PDGF,神經(jīng)生長因子NGF,堿性成纖維細胞生長因子FGF-2,乙型轉(zhuǎn)化生長因子TGF-beta和胰島素樣生長因子ILGF。
基質(zhì)膠的應(yīng)用原理
細胞生長環(huán)境:基質(zhì)膠為細胞提供一個支撐和生長的環(huán)境,促進細胞貼壁和生長。
影響基因表達:基質(zhì)膠能夠影響成年大鼠肝細胞基因表達,為研究細胞生物學(xué)機制提供重要手段。
促進血管生成: 基質(zhì)膠在血管生成實驗中發(fā)揮關(guān)鍵作用,有助于研究新血管的形成機制。
基質(zhì)膠的制備方法
EHS小鼠腫瘤提取: 基質(zhì)膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取的可溶性基底膜制備物。
層析技術(shù): 基質(zhì)膠的制備通常涉及層析技術(shù),確保其成分的純度和生物活性。
基質(zhì)膠的市場前景
全球市場規(guī)模擴大: 基質(zhì)膠市場的規(guī)模持續(xù)擴大,主要得益于生物技術(shù)的飛速發(fā)展。
實驗研究需求: 隨著實驗研究的不斷增多,對基質(zhì)膠的需求也在日益增長。
基質(zhì)膠在細胞生物學(xué)中的應(yīng)用
01
干細胞的研究
干細胞培養(yǎng): 基質(zhì)膠為干細胞培養(yǎng)提供理想的生長環(huán)境,促進干細胞的分化和增殖。
組織工程: 基質(zhì)膠在干細胞組織工程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,有助于構(gòu)建功能性組織。
02
代謝及毒理研究
代謝研究: 基質(zhì)膠在代謝和毒理學(xué)研究中應(yīng)用廣泛,有助于揭示細胞代謝機制。
藥物篩選: 基質(zhì)膠為藥物篩選提供重要的細胞模型和研究工具。
03
細胞侵襲實驗
Transwell細胞體外侵襲實驗: 基質(zhì)膠在Transwell細胞體外侵襲實驗中發(fā)揮關(guān)鍵作用,有助于研究細胞侵襲機制。
腫瘤細胞侵襲試驗: 基質(zhì)膠在開發(fā)某些腫瘤細胞侵襲試驗中發(fā)揮重要作用,為腫瘤研究提供重要支持。
基質(zhì)膠在其他實驗領(lǐng)域中的應(yīng)用
01
血管生成實驗
血管生成機制研究: 基質(zhì)膠在血管生成實驗中發(fā)揮關(guān)鍵作用,有助于研究新血管的形成機制。
藥物開發(fā): 基質(zhì)膠為血管生成藥物開發(fā)提供重要的實驗?zāi)P秃脱芯抗ぞ摺?/p>
02
類器官體外3D培養(yǎng)
類器官培養(yǎng): 基質(zhì)膠為類器官體外3D培養(yǎng)的研究提供理想的生長環(huán)境,促進類器官的發(fā)育和功能。
疾病模型: 基質(zhì)膠在構(gòu)建疾病模型中發(fā)揮關(guān)鍵作用,有助于揭示疾病的發(fā)生機制。
03
神經(jīng)再生研究
周神經(jīng)再生: 基質(zhì)膠在體內(nèi)外周神經(jīng)再生研究中發(fā)揮重要作用,為神經(jīng)再生研究提供重要支持。
神經(jīng)損傷修復(fù): 基質(zhì)膠為神經(jīng)損傷修復(fù)研究提供重要的實驗工具和模型。
04
教育與科研
教育應(yīng)用: 基質(zhì)膠在教育和科研中應(yīng)用廣泛,為培養(yǎng)科研人才和推動科學(xué)發(fā)展提供重要支持。
科研合作: 基質(zhì)膠為科研合作提供重要的實驗工具和模型,促進科學(xué)研究的深入和創(chuàng)新。
基質(zhì)膠常見分類及推薦應(yīng)用
根據(jù)不同的應(yīng)用需求,基質(zhì)膠有多種類型,每種類型都具有其特定的特點和推薦應(yīng)用。以下是基質(zhì)膠的一些常見分類及其推薦應(yīng)用:
01
標(biāo)準(zhǔn)型基質(zhì)膠:
特點:含有豐富的生長因子,如表皮生長因子、血小板衍生生長因子等。
推薦應(yīng)用:常規(guī)的細胞實驗,如2D和3D培養(yǎng),細胞侵襲、遷移實驗等。
02
低生長因子基質(zhì)膠:
特點:生長因子含量減少,減少了細胞生長和分化的促進作用。
推薦應(yīng)用:對基質(zhì)成分要求嚴格的實驗,如細胞信號通路和細胞因子等的研究。
03
高濃度基質(zhì)膠:
特點:蛋白濃度較高,有助于研究血管生成、腫瘤細胞遷移和體內(nèi)腫瘤模型的建立等。
推薦應(yīng)用:研究血管生成、腫瘤生長和體內(nèi)應(yīng)用研究,如高濃度蛋白可促進腫瘤生長。
04
無酚紅基質(zhì)膠:
特點:不含酚紅,適合需要進行熒光檢測或顯色反應(yīng)等分析的實驗。
推薦應(yīng)用:熒光檢測或顯色反應(yīng)等分析。
05
人胚胎干細胞專用基質(zhì)膠:
特點:經(jīng)過對人胚胎干細胞培養(yǎng)的測試,適合人胚胎干細胞的培養(yǎng)。
推薦應(yīng)用:人胚胎干細胞的培養(yǎng)和研究。
06
類器官用基質(zhì)膠:
特點:適合用于類器官的培養(yǎng),模擬體內(nèi)環(huán)境,支持細胞的三維生長。
推薦應(yīng)用:類器官的培養(yǎng),如器官芯片和疾病模型研究。
這些基質(zhì)膠類型各有特點,選擇合適的基質(zhì)膠類型可以大大提高實驗的成功率和數(shù)據(jù)的可靠性。在實際應(yīng)用中,應(yīng)根據(jù)實驗的具體需求選擇合適的基質(zhì)膠類型。
埃澤思基質(zhì)膠產(chǎn)品系列
類器官基質(zhì)膠產(chǎn)品
產(chǎn)品 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 | 應(yīng)用場景 |
標(biāo)準(zhǔn)型-基質(zhì)膠 | AC-1001081 | 5mL | 細胞生長、分化、形態(tài)研究、細胞化學(xué)功能、細胞遷移/侵襲等。 |
標(biāo)準(zhǔn)型低生長因子基質(zhì)膠 | AC-1001082 | 5mL | 適用于對基質(zhì)成分要求嚴格的實驗。如細胞信號通路和細胞因子的研究等。 |
高濃度-基質(zhì)膠 | AC-1001083 | 5mL | 適用于研究血管生成、腫瘤細胞遷移和體內(nèi)腫瘤模型的建立等。 |
高濃度低生長因子基質(zhì)膠 | AC-1001084 | 5mL | 適用于研究血管生成、腫瘤細胞遷移和體內(nèi)腫瘤模型的建立等。 |
保存條件:≤-10℃保質(zhì)期:36個月 |
產(chǎn)品優(yōu)勢
01
AC-1001081 標(biāo)準(zhǔn)型-基質(zhì)膠
① 多功能性: 適用于多種實驗類型,包括腫瘤類器官藥敏實驗、血管生成實驗和神經(jīng)軸突3D生長實驗,滿足不同研究需求。
② 快速凝固: 在37°C下迅速凝固,為細胞提供穩(wěn)定的三維支架環(huán)境,有助于快速實驗設(shè)置和高效實驗結(jié)果獲取。
③ 優(yōu)質(zhì)基質(zhì)支持: 提供穩(wěn)定且富含生物活性的環(huán)境,支持類器官的快速形成和神經(jīng)軸突的生長,確保實驗結(jié)果的可靠性和再現(xiàn)性。
02
AC-1001082 標(biāo)準(zhǔn)型 低生長因子基質(zhì)膠
① 低生長因子含量: 減少外源性生長因子對實驗的干擾,提供一個相對穩(wěn)定的微環(huán)境,有助于精確研究細胞特定的反應(yīng)。
② 優(yōu)化類器官培養(yǎng): 專為類器官培養(yǎng)設(shè)計,提供適宜的細胞支持環(huán)境,促進類器官的形成和生長。
③ 一致性和穩(wěn)定性: 產(chǎn)品成分一致,確保每批實驗的可重復(fù)性和穩(wěn)定性,適合長期實驗使用。
03
AC-1001083 高濃度-基質(zhì)膠
① 高濃度配方: 提供更堅固的三維結(jié)構(gòu)支架,支持細胞在體內(nèi)外的穩(wěn)定生長,特別適用于免疫缺陷小鼠成瘤實驗。
② 增強細胞支持: 高濃度基質(zhì)增加細胞與基質(zhì)的相互作用,促進細胞的附著、擴增和成瘤能力。
③ 適應(yīng)性廣: 可用于多種腫瘤細胞系,支持不同類型實驗的需求,尤其是需要更強支持的實驗設(shè)計。
04
AC-1001084 高濃度 低生長因子基質(zhì)膠
① 雙重優(yōu)化: 結(jié)合高濃度和低生長因子配方,適用于需要穩(wěn)定支持且避免外源性生長因子干擾的實驗,特別適合免疫缺陷小鼠成瘤實驗。
② 高效成瘤: 在成瘤實驗中提供增強的細胞支持,確保成瘤效率和實驗的可重復(fù)性。
③ 減少實驗變量: 低生長因子含量減少了實驗中的干擾因素,有助于更精確的實驗結(jié)果分析。
實驗操作
01
腫瘤類器官藥敏實驗(操作所需時間為2小時)
① 將擴增好足夠是的腫瘤類器官(實驗組)以及正常類器官(對照組)用4℃預(yù)冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基進行重懸,緩慢機械吹打,促進膠液化溶解,并保持類器官結(jié)構(gòu)完整(可用于懸浮培養(yǎng)于有5%基質(zhì)膠溶液的基質(zhì)膠表面)(Guillen al. 2022)?;蛘咄ㄟ^TryplE酶消化獲得單細胞懸液。
② 離心收集類器官細胞,并進行細胞計數(shù)。
③ 加入AppliedCell®基質(zhì)膠原液,與細胞進行混勻。
④ 將細胞與膠的混合物,通過排槍加入37℃預(yù)熱過的96孔板或者384孔板,立即將孔板放入培養(yǎng)箱。
⑤ 大約10min后,AppliedCell®基質(zhì)膠將凝固,加入相應(yīng)體積的類器官培養(yǎng)液進行培養(yǎng)。
⑥ 類器官形成后(如果是機械吹打,類器官將在傳代24h后就會形成;如果是酶消化,類器官會在3-5天后形成),每個孔分別加入含有PI染料以及不同種類、不同濃度的待篩選的抗腫瘤藥物。
⑦ 在高內(nèi)涵顯微鏡上進行活細胞成象,測定腫瘤類器官對各種藥物的敏感性。
02
血管生成實驗(以永生化HUVEC細胞系為例,操作所需時間為1小時)
① 將培養(yǎng)基換成饑餓細胞用培養(yǎng)基:加入含0.2%FBS,2mM L-谷氨酰胺,1mM丙酮酸鈉,100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時。
② 將AppliedCell®基質(zhì)膠均勻鋪滿96孔板底。注意:槍頭需提前預(yù)冷半小時。盡量在冰上操作,避免基質(zhì)膠過早固化,避免氣泡產(chǎn)生。
③ 將96孔板在細胞培養(yǎng)箱孵育30min,固化基質(zhì)膠。
④ 消化HUVEC細胞,并計數(shù)。
⑤ 將200μL的HUVEC細胞懸液(含5X10^4個細胞)加于含基質(zhì)膠的96孔板中。將96孔板放于培養(yǎng)箱。
⑥ 血管樣網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)將于3至12小時間形成。
⑦ 在血管網(wǎng)絡(luò)形成最佳時間,小心去除培養(yǎng)基,并用加入含活細胞染料1/1000 Calcein AM(綠色)的培養(yǎng)基進行染色,并用顯微鏡進行拍照記錄。
03
神經(jīng)軸突3D生長實驗(以大鼠胚胎神經(jīng)干細胞為例,操作所需時間為2小時)
① 取孕期12-15天的大鼠胚胎,用眼科剪和眼科攝分離出大腦皮層于4°C預(yù)冷的DMEM培養(yǎng)基中。
② 用吸管輕緩吹打,然后用70μm濾網(wǎng)過來,獲得單細胞懸液,并進行細胞計數(shù)。
③ 離心(300g,3min),棄上清。將細胞與AppliedCell®基質(zhì)膠進行混合,然后將基質(zhì)膠混合物滴加在24孔板中,每孔50μl。
④ 將24孔板放于培養(yǎng)箱,大約10min后,Applied Cell®基質(zhì)膠將凝固。加入1mL神經(jīng)元分化培養(yǎng)基:Neurobasal medium,2%B27,2mM L-glutamine,5%FBS,20ng/mL EGF和20ng/mL bFGF, 100U/mL penicillin 和100 μg/mL streptomycin。第二天開始,就能觀索到有明顯的神經(jīng)軸突生長。
⑤ 在第7天可觀察到大量的神經(jīng)突(Neurite)長出。
注意事項
AppliedCell®基質(zhì)膠在溫度高于10℃時就會開始凝固成膠,所以盡量在冰上操作基質(zhì)膠。
類器官傳代時,如果為了避免酶對類器官造成影響,可直接用4℃預(yù)冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基對基質(zhì)膠進行緩慢吹打,即可將類器官從基質(zhì)膠中釋放出來。
埃澤思即用型基質(zhì)膠
產(chǎn)品介紹
AC-1001007 即用型基質(zhì)膠
AC-1001097 Ready to Use Vtn
規(guī)格:100mL
保存條件:2~8℃,冰袋運輸
保質(zhì)期:12個月
用于培養(yǎng)板表面包被,為干細胞(ES/iPS)、心肌細胞等多種細胞提供貼壁基質(zhì)。
產(chǎn)品優(yōu)勢
* 性質(zhì)穩(wěn)定,可在4℃儲存
* 省掉多個準(zhǔn)備步驟(冰凍、解凍、稀釋),節(jié)省時間,提供實驗效率