在抗體藥早期研發(fā)階段，需要從抗體庫(kù)中篩選出能特異性結(jié)合目標(biāo)抗原且親和力較高的抗體，經(jīng)過(guò)一系列體外功能活性測(cè)定等對(duì)抗體進(jìn)一步篩選，并進(jìn)行優(yōu)化，最終獲得候選抗體。在抗體發(fā)現(xiàn)階段，一般會(huì)從幾千個(gè)樣本中篩選出600-1000個(gè)與抗原有結(jié)合活性的抗體，經(jīng)過(guò)初步篩選和成藥性評(píng)估后，得到10-20個(gè)候選抗體，然后再進(jìn)行體外功能活性檢測(cè)，整個(gè)過(guò)程耗時(shí)約3-5個(gè)月。

從抗體藥發(fā)現(xiàn)到體外活性檢測(cè)會(huì)涉及到大量的ELISA實(shí)驗(yàn)，不僅耗時(shí)而且耗力，瑞孚迪HTRF和AlphaLISA均相免洗平臺(tái)，提供抗體藥物研發(fā)不同階段的高通量檢測(cè)試劑，幫您準(zhǔn)確、快速地完成多樣本的檢測(cè)。與ELISA相比，均相免洗技術(shù)省去了包被、洗板、顯色等步驟，只需要加樣-孵育-檢測(cè)，即可完成整個(gè)實(shí)驗(yàn)，可節(jié)省您80%以上的人工和操作時(shí)間，也適用于自動(dòng)化高通量設(shè)備。

一、抗體篩選和優(yōu)化

抗體篩選是抗體發(fā)現(xiàn)中的重要環(huán)節(jié)，對(duì)抗體發(fā)現(xiàn)的結(jié)果起到關(guān)鍵作用。在篩選早期，選擇合適的高通量篩選技術(shù)顯得尤為重要。

針對(duì)抗體的篩選和優(yōu)化，瑞孚迪提供一系列雜交瘤檢測(cè)試劑盒、阻斷性抗體和功能性抗體篩選試劑盒、抗體定量檢測(cè)試劑盒以及toolbox，滿足各種蛋白互作檢測(cè)、抗體含量檢測(cè)及親和力檢測(cè)的需求。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：

• 實(shí)現(xiàn)高通量的抗體篩選：實(shí)驗(yàn)僅需加樣-孵育-檢測(cè)，2h即可完成

• 陽(yáng)性檢出率更高：無(wú)需洗板，對(duì)于一些低親和力的陽(yáng)性抗體，其檢出率更高

• 節(jié)省樣本：反應(yīng)體系僅需20 ul，適合珍貴樣本的檢測(cè)

以Hybridoma binding kit (6HIS antigen)為例，該試劑盒使用夾心法檢測(cè)與6HIS標(biāo)記抗原結(jié)合的小鼠雜交瘤上清液，試劑盒含有Eu供體標(biāo)記的抗6HIS抗體和用D2受體標(biāo)記的抗小鼠抗體，當(dāng)樣本中雜交瘤克隆產(chǎn)生的小鼠抗體與6HIS標(biāo)記的靶標(biāo)結(jié)合時(shí)，產(chǎn)生HTRF信號(hào)，信號(hào)強(qiáng)度與小鼠雜交瘤抗體濃度成正比，原理如圖1所示。

圖1. Hybridoma binding kit (6HIS antigen)反應(yīng)原理

① 雜交瘤檢測(cè)試劑盒（部分）

② 抗體篩選試劑盒（部分）

③抗體含量檢測(cè)試劑盒（部分）

④toolbox-自建體系

瑞孚迪PPI toolbox試劑包括Eu和Tb穴狀化合物以及 XL665 和 D2 標(biāo)記的抗標(biāo)簽抗體、抗種屬抗體和鏈霉親和素。您可以根據(jù)您靶點(diǎn)蛋白的標(biāo)簽以及抗體的種屬/亞型等，選擇合適的供體和受體對(duì)，自己搭建合適的基于HTRF/Alpha的抗體篩選模型。

二、生物學(xué)活性檢測(cè)

瑞孚迪基于HTRF、Alpha均相技術(shù)平臺(tái)和化學(xué)方法平臺(tái)，可提供細(xì)胞表面受體結(jié)合、信號(hào)通路相關(guān)指標(biāo)及殺傷活性等一系列檢測(cè)試劑，多維度表征抗體藥的體外生物活性，為抗體藥的研發(fā)、質(zhì)量控制提供重要支撐。

以cAMP Gs Dynamic Kit為例，該試劑盒基于競(jìng)爭(zhēng)法，試劑盒含有Eu（供體）標(biāo)記的特異性抗體和與D2偶聯(lián)的cAMP（受體），能夠檢測(cè)貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞中Gs偶聯(lián)受體的所有類型的化合物。細(xì)胞產(chǎn)生的天然cAMP與D2標(biāo)記的cAMP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合Eu標(biāo)記的抗cAMP的抗體，從而阻斷HTRF信號(hào)，樣本中cAMP的含量與HTRF信號(hào)強(qiáng)度成反比，反應(yīng)原理見(jiàn)圖2。

圖2. cAMP Gs Dynamic Kit反應(yīng)原理

1. FcγR和FcRn結(jié)合活性

瑞孚迪Tag-lite®是一種基于細(xì)胞的檢測(cè)方法，用于測(cè)定針對(duì)FcγR和FcRn的特異性抗體結(jié)合情況，適用于ADCC活性抗體以及更長(zhǎng)循環(huán)半衰期的抗體，還可用于評(píng)估抗體的去巖藻糖基化程度。

產(chǎn)品列表 (部分)

2. C1q結(jié)合活性

人C1q結(jié)合試劑盒用于檢測(cè)IgG的Fc端與人C1q 蛋白的結(jié)合情況。

3. 信號(hào)通路檢測(cè)

① 第二信使檢測(cè)

抗體與細(xì)胞表面受體結(jié)合后，會(huì)引發(fā)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，第二信使在這個(gè)過(guò)程中起著關(guān)鍵的傳遞和放大信號(hào)的作用，通過(guò)檢測(cè)第二信使的水平變化，可以間接反映抗體藥物的活性。

產(chǎn)品列表（部分）

② 磷酸化蛋白檢測(cè)

瑞孚迪提供穩(wěn)定便捷的HTRF&Alpha磷酸化蛋白檢測(cè)試劑盒，試劑盒應(yīng)用經(jīng)典雙抗夾心的檢測(cè)模型，標(biāo)記有供體和受體的特異性抗體識(shí)別磷酸化位點(diǎn)來(lái)檢測(cè)蛋白磷酸化水平，輕松實(shí)現(xiàn)2小時(shí)檢測(cè)磷酸化蛋白。省時(shí)，省力，靈敏度高，樣本消耗少，可替代諸如蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）或其他發(fā)光檢測(cè)等更為傳統(tǒng)的技術(shù)，使磷酸化蛋白檢測(cè)變得更加簡(jiǎn)單高效。且提供總蛋白檢測(cè)試劑盒，適合做歸一化處理，進(jìn)行客觀的數(shù)據(jù)分析。

產(chǎn)品列表（部分）

③ 細(xì)胞因子檢測(cè)

抗體藥可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活性，使其分泌細(xì)胞因子來(lái)發(fā)揮作用。細(xì)胞因子是一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)，參與調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長(zhǎng)等多種生理過(guò)程。檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌水平，可以評(píng)估抗體藥對(duì)免疫系統(tǒng)的激活或調(diào)節(jié)作用，以及其在免疫治療中的潛在效果。

產(chǎn)品列表（部分）

④ 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)

熒光素酶報(bào)告基因是體外研究信號(hào)通路的激活與調(diào)控的常用方法。抗體藥與細(xì)胞表面受體結(jié)合后，會(huì)引發(fā)細(xì)胞內(nèi)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活。通過(guò)構(gòu)建含有熒光素酶報(bào)告基因的細(xì)胞模型，將熒光素酶基因置于待研究信號(hào)通路的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子或調(diào)控元件的下游，當(dāng)抗體藥作用于細(xì)胞并激活相應(yīng)信號(hào)通路時(shí)，會(huì)導(dǎo)致熒光素酶報(bào)告基因的表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而產(chǎn)生可檢測(cè)的熒光信號(hào)。

產(chǎn)品列表（部分）

4. 細(xì)胞殺傷檢測(cè)

抗體藥細(xì)胞殺傷檢測(cè)是評(píng)估抗體藥物有效性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。它主要用于衡量抗體藥物對(duì)靶細(xì)胞（如腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞等）的殺傷能力，這對(duì)于研究抗體藥的治療潛力、篩選優(yōu)化藥物候選物以及理解其作用機(jī)制等方面都具有極其重要的意義。

瑞孚迪基于HTRF平臺(tái)、Delfia平臺(tái)和化學(xué)發(fā)光平臺(tái)，針對(duì)不同的檢測(cè)需求，提供多種細(xì)胞殺傷檢測(cè)檢測(cè)試劑。

① 人Perforin-1和Granzyme B檢測(cè)

人Perforin-1和Granzyme B檢測(cè)試劑盒均采用HTRF均相檢測(cè)法，反應(yīng)原理類似，以人Perforin-1試劑盒為例，該試劑盒含有兩種特異性抗人穿孔素抗體，它們分別用Eu穴狀化合物（供體）和 D2（受體）進(jìn)行標(biāo)記。信號(hào)強(qiáng)度與樣本中存在的穿孔素濃度成正比。

② 基于ATP的細(xì)胞活力檢測(cè)

ATP廣泛存在于所有活細(xì)胞中，在正常的活細(xì)胞中，ATP的含量相對(duì)穩(wěn)定，當(dāng)細(xì)胞受到抗體藥的殺傷作用時(shí)，細(xì)胞膜完整性被破壞，細(xì)胞內(nèi)的 ATP 會(huì)釋放到細(xì)胞外環(huán)境中。因此，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清或細(xì)胞裂解物中的 ATP 含量，可以反映細(xì)胞的存活狀態(tài)和抗體藥的細(xì)胞殺傷效果。

③ DELFIA EuTDA細(xì)胞毒性檢測(cè)檢測(cè)試劑盒

該試劑盒利用瑞孚迪DELFIA® 時(shí)間分辨熒光（TRF）法，檢測(cè)原理與鉻釋放試驗(yàn)相同，只不過(guò)其靶細(xì)胞負(fù)載的是一種 BATDA 配體，而非 51Cr，它不需要經(jīng)過(guò)特殊改造的細(xì)胞，用于測(cè)量化學(xué)細(xì)胞毒性、細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性以及抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC）。

推薦微孔板

將瑞孚迪的微孔板與Revvity的一系列檢測(cè)試劑、讀板機(jī)和自動(dòng)化技術(shù)配對(duì)，以獲得最佳的檢測(cè)性能并簡(jiǎn)化工作流程。

HTRF微孔板（部分）

Alpha微孔板（部分）

推薦酶標(biāo)儀

瑞孚迪VICTOR Nivo —— 一款設(shè)計(jì)緊湊、多功能酶標(biāo)儀

VICTOR Nivo酶標(biāo)儀，是一款多功能微孔板檢測(cè)儀，這款多功能酶標(biāo)儀功能強(qiáng)大、設(shè)計(jì)緊湊、操作簡(jiǎn)便，將所有檢測(cè)模式置于業(yè)內(nèi)最小的臺(tái)式系統(tǒng)中?？蓹z測(cè)可見(jiàn)/紫外光吸收（ABS）、化學(xué)發(fā)光（LUM）、熒光強(qiáng)度（FI）、熒光偏振（FP）、時(shí)間分辨熒光（TRF）、Alpha等多種模式。