檢測原理：
細胞上清液、樣本或標準品直接分配到檢測板中，通過 HTRF® 試劑進行檢測（384 孔低體積白色板或 Revvity 低體積 96 孔板，20 微升）。用 HTRF 供體和受體標記的抗體預(yù)先混合，并在一個分配步驟中加入，以進一步簡化檢測程序。通過簡單地按比例調(diào)整每次添加的體積，該檢測可以擴展到 1536 孔格式。

檢測數(shù)據(jù)分析：
四參數(shù)邏輯（4PL）曲線通常被推薦用于擬合 ELISA 標準曲線。這種回歸能夠在比線性分析更寬的濃度范圍內(nèi)準確測量未知樣本，使其非常適合用于分析細胞因子釋放等生物系統(tǒng)。

要充分了解如何處理 HTRF 數(shù)據(jù)處理以及 4PL 1/y2 擬合，請訪問此頁面。

Revvity 還與 Myassays合作，以幫助你進行數(shù)據(jù)分析。通過點擊此鏈接，你將能夠訪問一個免費的在線軟件來進行你的 IL-2 分析。

檢測細節(jié)：
人 IL-2 的 HTRF 標準曲線：
IL-2 標準曲線是在試劑盒中提供的檢測稀釋液 5 中生成的。

人 IL-2 檢測規(guī)格

分析性能：
批內(nèi)和批間

稀釋線性

加標回收

交叉反應(yīng)：
使用來自 IL-2 細胞因子家族的重組蛋白評估交叉反應(yīng)。對蛋白質(zhì)進行高達 10000 pg/mL 的測試，并為每種蛋白質(zhì)生成標準曲線。在檢測標準曲線上內(nèi)插信號以內(nèi)插濃度。該檢測是人類特異性的，因為使用該檢測未檢測到小鼠 IL-2 細胞因子。

檢測驗證：
對 PBMC 誘導(dǎo)的 IL-2 釋放的影響：
以每孔 25,000、50,000 和 100,000 個細胞的密度接種 PBMC，用 50 ng/mL 的 PMA/1 µg/mL 的離子霉素刺激 18 小時，并與（50 µg/mL）共同處理。然后將 16 µL 的上清液轉(zhuǎn)移到白色檢測板（384 孔低體積）中，使用 HTRF HP 人 IL-2 檢測試劑盒進行分析。

用 PMA / 離子霉素和共同處理的細胞系對 HTRF 人 IL2 試劑盒的驗證。

抗 CD3 和 CD28 抗體劑量反應(yīng)對 IL-2 分泌的影響：
以每孔 200,000 個細胞的密度接種 Jurkat 細胞，用不斷增加濃度的抗 CD3 和抗 CD28 抗體刺激 24 小時：抗 CD3 為 0、0.5、1、10 µg/mL，抗 CD28 為 0、1、5、20 µg/mL。然后將 16 µL 的上清液轉(zhuǎn)移到白色檢測板（384 孔低體積）中，使用 HTRF HP 人 IL-2 檢測進行分析。

抗 CD3 和 CD28 抗體劑量反應(yīng)對 IL2 分泌的影響。

來自不同供體的 PBMC 細胞中的 IL-2 分泌：
以每孔 100,000 個細胞的密度接種 PBMC，用 50 ng/mL 的 PMA/1 µg/mL 的離子霉素刺激 18 小時。然后將 16 µL 的上清液轉(zhuǎn)移到白色檢測板（384 孔低體積）中，使用 HTRF HP 人 IL-2 檢測試劑盒進行分析。

來自不同供體的 PBMC 細胞中的 IL2 分泌。