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高校實驗室如何去觀察綠色熒光蛋白GFP?
閱讀:7967 發(fā)布時間:2021-1-5GFP是什么?GFP 綠熒光蛋白(Green Fluorescent Portein,GFP)
綠色熒光蛋白是一類存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔腸動物體內(nèi)的生物發(fā)光蛋白,當受到紫外或藍光激發(fā)時,發(fā)射綠色熒光。其特點在于:它產(chǎn)生熒光無需底物或輔因子,發(fā)色團是其蛋白質(zhì)一級序列固有的來源于水母的氨基酸殘基組成。水母的綠色熒光蛋白很穩(wěn)定,無種屬限制,已在多種動植物細胞中表達成功并產(chǎn)生熒光。GFP 的熒光受外界的影響較小,另外GFP 的檢測十分方便,而對細胞的傷害小。
綠色熒光蛋白GFP的發(fā)光特性:
GFP吸收的光譜峰值為395nm(紫外),并有一個峰值為470nm的副吸收峰(藍光);發(fā)射光譜峰值為509nm(綠光),并帶有峰值為540nm的側(cè)峰(Shouder)。雖然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于該激發(fā)光對細胞的傷害小,因此通常多使用該波段光源(多為488nm)。此外,GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽(FITC)很相似,兩者通常共有一套濾光片。GFP熒光極其穩(wěn)定,在激發(fā)光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素強,特別是在450~490nm藍光波長下穩(wěn)定。類似的,GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高,抗光漂白能力強,因此適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物,因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報告蛋白,其作用是任何其它酶類報告蛋白*的。但因為GFP不是酶,熒光信號沒有酶學(xué)放大效果,因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白,比如螢火蟲熒光素酶等。
熒光蛋白激發(fā)光源的主要產(chǎn)品應(yīng)用:
檢測轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白(GFP)基因、紅色熒光蛋白(DsRed)基因植物:水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、擬南芥
檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因動物:小鼠、兔子、猴子等;
檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因微生物:細菌、真菌、酵母等;
檢測GFP、DsRed基因組織特異性表達;
綠色熒光蛋白GFP的常規(guī)觀察方法有三種:
1.熒光顯微鏡
熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) : 熒光顯微鏡是以紫外線為光源, 用以照射被檢物體,使之發(fā)出熒光,然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。 細胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一。目前在常用的方法就是采用熒光顯微鏡觀察,熒光顯微鏡在實驗室普及,但不足的是必須采集葉片或動物切片進行觀察,對培養(yǎng)的標本進行破壞,無法進行活體觀察。
2.紫外光源
采用紫外光源(又叫紫外線燈、黑光燈)觀察也非常方便,但如果觀察植物,植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會發(fā)出熒光,對gfp發(fā)出的熒光也會產(chǎn)生干擾,另外,標本長時間在紫外光源照射下對GFP標本組織也會造成破壞。
3.便攜式GFP激發(fā)光源
采用便攜式GFP激發(fā)光源(又叫熒光蛋白觀測鏡)是便捷、方便的觀察方法,因GFP在470nm有一個很高的吸收峰,采用 470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光,在觀察gfp熒光時,因為激發(fā)光為強烈的藍色光線,佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號。推薦使用美國LUYOR-3260便攜式激發(fā)光源。因此,使用便攜式GFP激發(fā)光源為方便有效的觀察辦法。
下面為您推薦LUYOR-3415RG雙波長熒光蛋白激發(fā)光源
LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀察燈的產(chǎn)品優(yōu)勢:
1.大功率輸出,無需暗室,也可輕松激發(fā)熒光。
2.檢測效率高,黑暗中檢測一目了然
3.LED壽命50000h,且系統(tǒng)穩(wěn)定,可長時間使用
4.直接檢測,而無需用底物顯色,所以安全,對被檢測對象無傷害
LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的物理技術(shù)參數(shù):
波長:可任意選擇2種波長:365nm,400nm, 450nm, 485nm,520nm
質(zhì)量:凈重0.9kg,毛重:4kg,尺寸:180x200mm(長x高),頭部直徑120mm。
功率:單波長15w,總功率27w。
輸入電壓:交流100-260v,頻率50/60Hz。
包裝箱尺寸:400x300x150mm(長x寬x高)
距燈150mm處照射直徑為180mm