ELISA實驗怎樣正確溶解、稀釋標準品

ELISA標準曲線是結(jié)果計算的尺子，標準品是ELISA實驗成功與否的關(guān)鍵點。怎樣正確溶解、稀釋標準品呢？

1、粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。

2、根據(jù)瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解 10-30min，讓粉末溶解。

注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。

3、標準品梯度稀釋

(1)標準品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標準品稀釋液，梯度稀釋標準品。若細胞上清樣本，建議用細胞培養(yǎng)基梯度稀釋標準品。

(2)耗材準備：準備8個1.5Ml離心管，寫上S1-S7、空白。

(3)梯度稀釋：根據(jù)說明書，每管加入等體積的標準品稀釋液(培養(yǎng)基)。吸取同體積溶解好的標準品到S1管中，吹打10次混勻，渦旋5S。從S1管中吸取同體積溶液到 S2管，吹打10次混勻，渦旋5s。同法稀釋S3-S7濃度。

(4)空白：標準品稀釋液(培養(yǎng)基)作為空白即零濃度。

注意：梯度稀釋標準品時，渦旋震蕩混勻后可短暫離心，讓到蓋子、壁上的液體到管底，再開始稀釋下個濃度。