動物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟

動物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)條件

1、無菌、無毒的環(huán)境：對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理，通常還要在培養(yǎng)液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物累積對細(xì)胞自身產(chǎn)生危害。

2、營養(yǎng)物質(zhì)：無機物（無機鹽、微量元素等），有機物（糖、氨基酸、促生長因子等）

3、血清和血漿（提供細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份）

4、溫度和pH（36.5±0.5℃，7.2～7.4）

5、氣體環(huán)境（95%的空氣+5%CO?的混合氣體）

6、其中5%CO?氣體是為保持培養(yǎng)液的pH穩(wěn)定

動物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟

注：所有步驟應(yīng)在無菌無毒的超凈工作臺進行。胰蛋白酶處理時間不宜過長。

取離體的動物組織，器官或細(xì)胞，剪碎并加入胰蛋白酶分解成單個細(xì)胞，配置形成細(xì)胞懸液。

制備動物細(xì)胞培養(yǎng)液體培養(yǎng)基（需加入血清，保證無菌無毒），將細(xì)胞接種至培養(yǎng)基，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中進行初代培養(yǎng)。

當(dāng)細(xì)胞增殖達到一定程度，出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時，用胰蛋白酶再次處理，并用細(xì)胞懸液吹打貼壁生長的細(xì)胞。進行細(xì)胞計數(shù)。

依照計數(shù)結(jié)果，分瓶培養(yǎng)，進行傳代培養(yǎng)。獲得細(xì)胞系或細(xì)胞株。